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近年来,随着新疆葡萄产业的异军突起,种植面积不断扩大,病毒病的发生也越来越普遍。因此,确定葡萄病毒病的种类,从源头上杜绝病原是控制葡萄病毒病发生蔓延和安全防控的重要举措。及时建立可高效、特异诊断葡萄病毒的检测手段,以从源头对该类病毒进行防控。本试验通过田间葡萄病毒病进行调查、RT-PCR扩增及其克隆、序列分析和系统发育分析,明确了三种侵染葡萄的重要病原病毒,分别为GFKV、GRSPa V、GLRa V2,其中GRSPaV的侵染率最高,为51.4%,其次是侵染率为48.6%的GLRa V2和侵染率为36.1%的GFKV。GFKV新疆分离株(GFKV)与GFkV马其顿分离株(KF594431)和中国辽宁分离株(JF927942)同源性分别为96.31%、91.03%;GRSPaV新疆分离株(GRSPaV)与GRSPa V美国分离株(AY368590)同源性达96.59%;GLRaV2新疆分离株(GLRa V2)与GLRaV2中国分离株(Y14131)同源性达93.78%,与法国(EF012721)和中国四川(DQ911147)分离株同源性分别为93.21%和92.91%,表明3种葡萄病毒在新疆发生比较普遍,且新疆分离株与国内其它地方的分离株存在较大差异。根据侵染新疆葡萄主要病毒(GRSPaV、GLRaV2)的外壳蛋白基因,设计两种特异性扩增引物对,建立了能够同时检测2种病毒的双重RT-PCR检测体系。该体系扩增出的GRSPaV、GLRaV2目的基因条带的大小分别为470 bp、589 bp。病毒核酸最少检测浓度可达0.9 pg/ul,灵敏度与单重RT-PCR相近。同时本研究根据GRSPaV的CP基因的特异性,设计了能够检测该病毒的特异性引物及Taq Man探针。对扩增体系及扩增条件分别进行优化,最终确定此病毒的Taq Man实时荧光定量PCR检测方法的最优扩增体系和条件,此建立方法最高灵敏度可以达到0.0475 fg/ul,比普通RT-PCR灵敏度高1000倍以上。