五重PCR检测转基因大豆及其食用油脂的研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yuyugugu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
随着转基因产品商品化,转基因植物、动物、微生物加工而成的转基因食品在传统食品市场中的份额在不断加大,转基因食品已经不知不觉的走进了人们的餐桌,进入了食物链。然而,转基因食品中含有新的遗传物质,即外源DNA以及由外源基因编码的新蛋白,而传统食品是不存在这些情况的,并且传统食品是经过人类几千年的食用证明是安全的,因此转基因食品的安全性是摆在人类面前的重大难题;由于转基因食品的安全性在较短的时间内无法确定,因此,目前各国对转基因食品都采用标签制度进行管理,所以急需建立一套能够对转基因食品进行准确、快速检测的方法。根据已经商品化的转基因大豆种类,确定了以35S启动子(Cauliflowermosaicvirus 35S,CaMV3 5S)、Nos终止子(Nopalinesynthase,Nos)、NPTⅡ、CP4-EPSPS四种外源基因和大豆内源基因(Lectin)为检测的目的片段,建立了五重PCR反应体系,并采用改进的方法提取DNA,进行PCR扩增,实现了四个外源基因的特异性同步检测,检测了已知转基因大豆、市售大豆和转基因食用油脂,确定了检出限为0.1%。五重PCR反应体系最终确定为:总反应体系为58.5μL。其中包括0.5μL(5U/μL)Taq,5μL 10×PCR buffer,4μL dNTPs混合物,6μL Mg2+,Lectin正向和反向引物各为2μL,CaMV正向和反向引物各为1.9μL,NPTⅡ正向和反向引物各为1.91μL,CP4-EPSPS正向和反向引物各为2μL,NOS正向和反向引物各为1.7μL,模版4μL,ddH2O 201μL。五重PCR反应体系扩增条件:94℃预变性5min,在按94℃40s→57℃30s→72℃30s进行35个循环,最后72℃延伸6min。PCR反应产物在2%的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果。对PCR扩增产物进行了DNA测序,CaMV35S、NOS、NPTⅡ、CP4-EPSPS、Lectin的PCR扩增产物DNA序列与文献报道的靶基因序列的同源性分别为:100%、95%、99%、100%、99%,从而证实PCR扩增产物确为目的扩增产物。通过本论文的研究表明,五重PCR是一种可行有效的转基因大豆及豆制品检测方法,具有广阔的应用前景。
其他文献
《生物多样性公约》是综合保护全球生物多样性的国际公约。公约目标包括了保护生物多样性,对生物多样性的组成部分进行可持续利用和公平合理分享由利用遗传资源而产生的惠益
那些为工业活动而建造的建筑物和构筑物、其生产的过程与使用的生产工具,以及所在的城镇和景观,连同其他的有形的或无形的表现,都具有基本的重大价值。——国际产业遗存保护
我国东南沿海台风活动频繁,每次台风过后,造成大量房屋损坏甚至倒塌。历次风灾调查表明,在风灾破坏的各类房屋中,低矮房屋超过半数以上。因此,深入开展以现场实测和模型试验
文学与自然的关系问题同文学的起源一样古老,而大自然与人类的文学活动结伴而行,两者的关系问题不断被提问,又不断被赋予新的意义。当人类的历史步入现代时空,人类相对于自然
毛细管电泳(Capillary Electrophoresis, CE)以其样品处理简单、快速、经济、自动化及越来越低的检出限等优点,被广泛应用于生物、医药、化工、环境等领域。胶束电动毛细管电
菜籽水酶法提油工艺在国内外很多文献都有相关报道,但是使用酶的品种多、酶添加量大、反应周期长而且提油率较低,这些因素限制了水酶法提油工艺的工业化推广。本论文对水酶法提
利用Bac-to-Bac昆虫-杆状病毒表达系统分别构建了含有新城疫强毒株M、F、NP和HN等4个结构基因的单顺反子重组杆粒,经转染后,观察Sf9细胞病变以及PCR鉴定结果表明成功构建了
1 医案举隅例1。黎某,男,52岁,工人,因眼黄,皮肤黄,皮肤严重瘙痒,全身乏力,上腹不适,食欲不振1周,于2002年8月5日入住省二医普外科,查肝功能:血清胆红素系统:碱性磷酸酶,γ-
近年来,各国积极推进对海洋资源的探索。在海底矿藏资源挖掘、渔业捕捞、水下机器人定位等应用中,水下目标跟踪的研究显得尤为重要,其精度要求也越来越高。水下目标跟踪系统
<正>传统粗晶材料的循环变形主要由位错结构(如驻留滑移带、位错包、迷宫结构等)来承担。细化晶粒能够提高材料的疲劳强度,但由于晶界对位错运动和储存的限制,其循环变形主要