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随着转基因产品商品化,转基因植物、动物、微生物加工而成的转基因食品在传统食品市场中的份额在不断加大,转基因食品已经不知不觉的走进了人们的餐桌,进入了食物链。然而,转基因食品中含有新的遗传物质,即外源DNA以及由外源基因编码的新蛋白,而传统食品是不存在这些情况的,并且传统食品是经过人类几千年的食用证明是安全的,因此转基因食品的安全性是摆在人类面前的重大难题;由于转基因食品的安全性在较短的时间内无法确定,因此,目前各国对转基因食品都采用标签制度进行管理,所以急需建立一套能够对转基因食品进行准确、快速检测的方法。根据已经商品化的转基因大豆种类,确定了以35S启动子(Cauliflowermosaicvirus 35S,CaMV3 5S)、Nos终止子(Nopalinesynthase,Nos)、NPTⅡ、CP4-EPSPS四种外源基因和大豆内源基因(Lectin)为检测的目的片段,建立了五重PCR反应体系,并采用改进的方法提取DNA,进行PCR扩增,实现了四个外源基因的特异性同步检测,检测了已知转基因大豆、市售大豆和转基因食用油脂,确定了检出限为0.1%。五重PCR反应体系最终确定为:总反应体系为58.5μL。其中包括0.5μL(5U/μL)Taq,5μL 10×PCR buffer,4μL dNTPs混合物,6μL Mg2+,Lectin正向和反向引物各为2μL,CaMV正向和反向引物各为1.9μL,NPTⅡ正向和反向引物各为1.91μL,CP4-EPSPS正向和反向引物各为2μL,NOS正向和反向引物各为1.7μL,模版4μL,ddH2O 201μL。五重PCR反应体系扩增条件:94℃预变性5min,在按94℃40s→57℃30s→72℃30s进行35个循环,最后72℃延伸6min。PCR反应产物在2%的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果。对PCR扩增产物进行了DNA测序,CaMV35S、NOS、NPTⅡ、CP4-EPSPS、Lectin的PCR扩增产物DNA序列与文献报道的靶基因序列的同源性分别为:100%、95%、99%、100%、99%,从而证实PCR扩增产物确为目的扩增产物。通过本论文的研究表明,五重PCR是一种可行有效的转基因大豆及豆制品检测方法,具有广阔的应用前景。