从Caveolin-1/Notch信号通路探补肾中药单体促神经干细胞增殖的作用机制

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目的:1.1探讨补肾中药单体淫羊藿苷和马钱苷对神经干细胞增殖的影响,明确其促神经发生的作用。1.2从分子水平探讨补肾中药单体淫羊藿苷和马钱苷促神经干细胞增殖的作用机制,为临床使用中医药治疗脑血管病提供实验依据。方法:2.1建立正常与Caveolin-1敲除胎鼠脑神经干细胞体外培养体系,采用免疫细胞化学法鉴定细胞。将细胞分为空白组,淫羊藿苷不同剂量组和马钱苷不同剂量组,每组设10-6mol/L、5×10-7mol/L、10-7mol/L.5×10-8mol/L、10-8mol/L.5×10-9mol/L、10-9mol/L7个浓度,WST和神经克隆球计数的方法测定细胞增殖情况,并筛选最佳药物浓度。2.2选用10-mol/L、5×10-7mol/L、10-7mol/L三个药物浓度作用于正常神经干细胞及Caveolin-1基因敲除小鼠神经干细胞,采用WST和神经克隆球计数的方法探讨Caveolin-1在细胞增殖中的作用。2.3采用PCR法检测药物干预不同来源神经干细胞Notch-1、Hes-及Jagged-的表达,以进一步研究淫羊藿苷和马钱苷的作用机制。结果:3.1Caveolin-1敲除胎鼠神经干细胞生物特性与同源野生鼠细胞相似,但其增殖能力较强,较易出现分化。3.2淫羊藿苷和马钱苷以剂量依赖性方式发挥促神经干细胞增殖的作用,促增殖效果随单体浓度的增高而增加。WST结果提示:除马钱苷5×10-9mol/L、109mol/L组与空白对照组相比差异无统计学意义(p>0.05),其余各组促增殖作用效果显著(p<0.05)。细胞计数结果提示:淫羊藿苷10-mol/L组和马钱苷5×10-mol/L、10-9mol/L组与空白对照组相比差异无统计学意义(p>0.05),其余各组促增殖作用效果显著(p<0.05)。3.3Caveolin-1基因敲除细胞和正常细胞的克隆球形成差异显著(p<0.05)。淫羊藿苷和马钱苷同样以剂量依赖性方式发挥促Caveolin-1基因敲除神经干细胞增殖的作用,促增殖效果随单体浓度的增高而增加。与对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。3.4淫羊藿苷和马钱苷可以上调Notch信号通路Notch-1、Hes-1和Jagged-1的表达(p<0.05)。两种细胞比较发现,Caveolin-1基因缺失下调了Notch信号通路的表达。同一药物作用于不同细胞时,淫羊藿苷的10-6mol/L浓度组Notch-1的表达,各药物浓度组Hes-1及Jagged-1的表达差异不显著,无统计学意义(p>0.05)。马钱苷用药结果发现,马钱苷的10-6mol/L浓度组Notch-1的表达,以及10-6mol/L、5×10-7mol/L、10-7mol/L浓度组Hes-1的表达差异不显著,无统计学意义(p>0.05)。结论:4.1淫羊藿苷和马钱苷具有促进神经干细胞增殖的作用。4.2Caveolin-1基因缺失影响细胞增殖。4.3淫羊藿苷和马钱苷可通过调节Notch信号通路Notch-1、Hes-1和Jagged-1的表达以达到促神经干细胞增殖的作用。4.4Caveolin-1影响Notch信号通路的表达
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