白藜芦醇(Resveratrol)对食管癌EC109细胞生物学作用的初步研究

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【背景及目的】白藜芦醇(Resveratrol,Res)化学名为3,4’,5-三羟基-1,2-二苯乙烯,是存在于葡萄皮、花生、红酒中的一种植物多酚类物质,具有广泛的生物活性和药理活性。研究认为Res是一种重要的心血管保护因子,具有抗氧化,调节脂质代谢,抑制低密度脂蛋白的氧化、减少花生四烯酸的产生、抑制血小板聚集等功能。最近的研究发现Res还是重要防癌因子,体外实验研究已证实Res可通过干预细胞内信号传导、影响细胞周期蛋白的表达等途径而诱导多种肿瘤细胞的凋亡。本文旨在研究白藜芦醇对人食管癌EC109细胞的生长抑制、凋亡诱导作用,并初步探讨白藜芦醇对食管癌细胞的作用机制,以期为临床改善食管癌的治疗现状提供理论依据。【材料和方法】用不同浓度的白藜芦醇处理人食管癌EC109细胞,通过MTT法检测白藜芦醇对EC109细胞生长的抑制作用;倒置相差显微镜和Hoechest33258荧光染色观察EC109细胞的形态学改变:DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;透射电镜观察白藜芦醇作用后细胞超微结构的改变;流式细胞术检测白藜芦醇作用后的细胞周期分布和细胞凋亡;Western Blot检测白藜芦醇作用后Annexin I蛋白表达量的变化情况。【结果】白藜芦醇能够抑制EC109细胞的生长增殖,并呈时间和剂量依赖性:500μmol╱L Res作用48h后,倒置相差显微镜及荧光显微镜观察均可见凋亡细胞的典型形态学变化;琼脂糖凝胶电泳显示500μmol╱L Res处理组出现明显的DNA梯形带;经白藜芦醇处理的EC109细胞可见细胞超微结构的改变:细胞表面绒毛突起减少,胞质内空泡化及染色质边集等凋亡形态的改变:白藜芦醇能够影响EC109细胞的细胞周期分布,使细胞周期阻滞于S期,G0/G1期细胞数量减少;125、250、500μmol/L Res处理组出现明显的亚二倍体峰;Western Blot检测显示经白藜芦醇处理0、1、3、6、12、24、48h的EC109细胞,其Annexin I/β-actin光密度积分值之比分别为0.1514、0.2019、1.2877、1.3263、1.8854、1.9585、2.0457,说明白藜芦醇增强Annexin I蛋白的表达。【结论】白藜芦醇能够抑制EC109细胞的生长与增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性。白藜芦醇可以使EC109细胞周期阻滞于S期,抑制细胞DNA合成,并且这种作用呈剂量依赖性。白藜芦醇可诱导EC109细胞发生凋亡改变。白藜芦醇能够上调EC109细胞Annexin I蛋白的表达。
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