中药连翘有效成分连翘酯甙分离提取及药效学活性研究

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本论文共分为七章,系统地研究了中草药连翘有效成分连翘酯甙的分离提取方法、提取工艺、理化性质以及生物活性。第一章对中草药连翘、弹性蛋白酶抑制剂及天然抗氧化剂的研究进展状况作了简要回顾总结。第二章利用大孔吸附树脂和低压液相制备色谱对连翘酯甙进行了分离提取及鉴定研究。结果显示使用大孔吸附树脂预分离,大孔吸附树脂在富集连翘酯甙的同时,可除去大量杂质,所用溶剂仅为大量的水和少量乙醇,减少了有毒溶剂的使用,并使下一步用硅胶柱层析分离、纯化时不需经反复柱层析即可得到较好产物。第三章利用紫外吸收光谱和荧光光谱研究了连翘酯甙的光谱性质和稳定性。发现连翘酯甙对碱、热的不稳定性。建议从连翘中提取连翘酯甙时,要避免使用强碱,避免高温,最好将温度控制在60℃左右。合理解释了以连翘为主要原料制成的中成药银翘解毒丸,银翘解毒片等中为什么检测不到连翘酯甙。第四章对连翘酯甙的提取工艺进行了详细研究,建立了一套适用于规模化提取连翘酯甙的方法。利用本工艺从药用植物连翘中提取分离连翘酯甙,使用溶剂安全无毒,对环境无污染;使用的分离材料大孔吸附树脂易于洗脱再生,有益于多次利用;提取量大,效率高,提取物中连翘酯甙含量大于40%。第五章利用琼脂平板法和酶活力测定法分别研究了多种中草药提取物以及中草药有效成分对猪胰弹性蛋白酶(PPE)活性的抑制作用。研究发现连翘酯甙、氯原酸等中草药有效成分对PPE 有较强的抑制作用,黄芩的丙酮提取物有极强的抑制作用。进一步对连翘酯甙(含量为约40%)、黄芩的丙酮提取物以及复方中药进行了动物实验,表明黄芩丙酮提取物对实验性动物肺气肿病变改善不大,连翘提取物对实验性动物肺气肿病变虽然有改善,但改善程度也不如复方大。第六章利用化学发光法以及NBT 法研究了连翘酯甙及其同系物对HO·、H2O2 以及O-2·的清除作用。发现连翘酯甙对活性氧具有较强的清除能力。量子化学计算(PM3、RHF)初步探讨了连翘酯甙结构和活性的关系,结果显示连翘酯甙结构中的A 环酚羟基和B 环酚羟基是活性基团,且两活性位点对活性氧的清除能力相当。猪油实际体系验证发现:连翘酯甙(含量为约60%)在猪油体系确实具有清除自由基的功效,能延长猪油保存期,其效果略比BHA 强。同时研究还发现磷酸、酒石酸、拧檬酸对连翘提取物的抗氧化活性具有增效作用。附录1 利用SFE-CO2技术以氨水作碱化剂、无水甲醇为夹带剂,通过正交实验研究SFE-CO2萃取苦参总生物碱最佳的萃取条件。
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