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本论文选用谢氏丙酸杆菌结合理性育种技术，分别采用亚硝基胍(NTG)和紫外线(UV)诱变结合抗代谢抑制剂法成功地得到一株稳定的高产菌株，命名为P.shermaniiN-U-11。在原始的发酵条件下，高产突变株P.shermaniiN-U-11摇瓶发酵72h的维生素B12产量(27.06mg/L)较之母株P.shermaniiY-31(15.89mg/L)提高了70.3％。利用单次单因子法确定了该突变株P.shermaniiN-U-11合成维生素B12的最佳碳源为葡萄糖+糖蜜；最佳碳源含量为15％；最佳氮源为玉米浆；对产维生素B12有促进作用的金属离子按照Ca2+、K+、Fe2+、Al3+、Cd2+、Ba2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+的顺序，其促进作用依次增强；最适Co2+离子浓度为70mg/L；最适Mg2+离子浓度为10mg/L，并且最适镁盐为MgCl2；最佳装液量为20％；最佳菌龄为16h；最佳接种量为12.5％。通过单次单因子优化，突变株P.shermaniiN-U-11发酵72h的维生素B12产量较原始培养条件下维生素B12产量(27.06mg/L)提高了52.2％。利用Plackett-Burman设计法从初始pH值、总碳量、W葡萄糖：W糖蜜、玉米浆、KH2PO4、(NH)2HPO4、FeSO4、MgCl2、MnSO4、CaCl2、NaCl和CoCl2的浓度共十二个因子中筛选出W葡萄糖：W糖蜜、玉米浆、MnSO4和CaCl2四个因子对维生素B12的产量影响较大，这四个因子对目标的影响的显著水平分别是93％、92.1％、92.4％和92.5％。采用响应面法之一的中心组合设计来确定W葡萄糖。对发酵条件优化前后突变株P.shermaniiN-U-1196h的生长与合成维生素B12能力进行了比较，发现维生素B12产量都是在96h达到最高值。