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水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要由介体电光叶蝉(Recilia dorsalis)进行传播。近年来关于电光叶蝉与RGDV互作方面的研究相继增多,但在探究电光叶蝉先天免疫机制方面还不多。病毒通过侵染宿主细胞来实现其存活并增殖,自噬作为一种有效的防御途径,可以保护细胞免于受病原微生物的侵害。明确RGDV侵染介体电光叶蝉对细胞自噬反应的影响,可为阐明电光叶蝉传播RGDV的特异性机理提供依据。本研究主要探讨RGDV是否会诱导介体昆虫培养细胞及虫体内的自噬反应,进而影响自身的增殖和扩散,以揭示RGDV与介体昆虫互作的机制。首先分析电光叶蝉转录组中自噬Marker蛋白Atg8的基因和氨基酸序列,设计特异引物克隆Atg8基因全长片段。随后连接至pDEST17原核表达载体,转化Rosetta菌诱导表达,SDS-PAGE后收集目的蛋白条带,免疫小白鼠,制备抗Atg8多克隆抗体,并交联荧光素。接下来利用免疫荧光标记技术在RGDV侵染的电光叶蝉培养细胞中标记自噬蛋白Atg8和RGDV外壳蛋白P8,结果表明,RGDV侵染电光培养细胞可以诱导细胞自噬现象的发生,并且自噬随着RGDV在细胞内的增殖扩散而逐渐增强。进一步解剖携带RGDV的电光叶蝉组织器官,运用免疫荧光标记检测自噬蛋白Atg8与RGDV外壳蛋白P8在各个组织器官中的定位情况,结果表明自噬现象仅发生在电光叶蝉中肠中,唾液腺、精巢和卵巢中均未见特异的颗粒状的自噬蛋白。这表明RGDV仅诱导了电光叶蝉中肠的自噬反应。为了明确RGDV诱导的细胞自噬对病毒增殖和扩散的影响,我们采用自噬抑制剂(3-MA)和诱导剂(Rapamycin)以及RNA干扰(RNA interference,RNAi)处理电光叶蝉培养细胞和虫体抑制或诱导细胞自噬,免疫荧光标记和RT-qPCR检测结果都显示诱导细胞自噬,有利于病毒在细胞或虫体内的扩散,抑制自噬则不利于病毒的扩散。传毒实验进一步表明,诱导细胞自噬促进介体昆虫的传毒效率。因此,RGDV侵染电光叶蝉培养细胞和虫体均可诱导细胞自噬的发生,且诱导自噬可促进RGDV在细胞或虫体的扩散。该研究结果将为进一步探究RGDV与电光叶蝉互作机制提供依据。