论文部分内容阅读
目的观察LINGO-1在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠侧脑室周围表达的时程变化,探讨LINGO-1在EAE发生、发展中的可能作用,为在特定的时间窗内采用LINGO-1抗体治疗EAE提供线索和实验室证据。方法雌性Wistar大鼠50只,随机分为EAE组25只,对照组25只。以新鲜豚鼠全脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH)加完全福氏佐剂(complete freund’s adiuvant,CFA)为抗原,免疫接种雌性Wistar大鼠,并辅以百日咳疫苗原浆液(pertussis vaccine,PV)以增加血脑脊液屏障的通透性,建立EAE动物模型。EAE组随机分为第11、15、18、24、30天5个时点亚组,每个亚组5只。对照组用9g/L盐水代替豚鼠全脊髓匀浆,同样随机分为5个时点亚组。各亚组大鼠分别在其相应时点处死。观察各组大鼠发病、体重变化情况并进行神经功能评分。取大鼠大脑侧脑室周围组织切片进行检测:用苏木素一伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后在光镜下进行炎性病灶计数;采用Luxol坚牢蓝.焦油紫神经髓鞘染色法行髓鞘染色,了解髓鞘脱失情况;采用免疫组织化学法和半定量计数检测各组不同时期大鼠侧脑室周围LINGO-1的表达情况;并采用SPSS16.0软件包进行统计学分析。结果1.各组大鼠的临床表现:对照组各亚组大鼠在实验过程中无发病,神经功能评分为0,无体重损失;抗原免疫后9天左右EAE组大鼠陆续发病,至第14、15天左右达病情高峰期,EAE组先后共有22只大鼠发病,发病率为88.00%;EAE组各亚组大鼠的神经功能评分随病情加重而上升,随病情缓解而下降,在第15天发病高峰期达到最高值;体重损失也在第15天表现最为显著。2.各组大鼠侧脑室周围HE染色病理结果:对照组大鼠脑组织HE染色结构清晰,无炎性细胞浸润。EAE组大鼠第11天时脑组织内已出现炎性病灶;第15天时炎性病灶范围扩大、数目增加;第18天炎性病灶减少、程度减轻;第24天,第30天炎性病灶基本消失。比较EAE组各时点亚组大鼠侧脑室周围炎性病灶数,发现以第15天亚组大鼠炎性病灶数最多,与第11天、第24天比较差异有显著性。(P＜0.01)3.Luxol坚牢蓝-焦油紫神经髓鞘染色:对照组各亚组大鼠脑内无髓鞘脱失。EAE组在抗原免疫后第11天已有轻微的髓鞘脱失;在第15天髓鞘脱失最为严重,可见大片或融合的脱髓鞘灶,甚至轴索染色亦缺失,呈空泡样改变;第18、24天髓鞘脱失缓解;第30天偶有单个脱髓鞘灶。4.各组大鼠侧脑室周围LINGO-1表达的免疫组化结果:对照组各亚组大鼠侧脑室周围LINGO-1表达无明显差异(P＞0.05)。与对照组同期各亚组比较:EAE组第11天亚组(P＜0.05)、第15天亚组(P＜0.01)LINGO-1表达水平下降;EAE组第18天亚组LINGO-1表达水平有轻微上升,但差异无显著性(P＞0.05);EAE组第24、30天亚组LINGO-1表达水平有上调(P＜0.01)。EAE组内比较:随着病程的延长,第15天亚组较第11天亚组LINGO-1表达水平降低(P＜0.01);第18天亚组较第15天亚组LINGO-1表达水平有所上调(P＜0.01);第24天亚组比第18天亚组LINGO-1表达水平又有上升(P＜0.01);第30天亚组比第24天亚组LINGO-1表达水平下降(P＜0.01)。结论LINGO-1在EAE大鼠侧脑室周围表达呈动态变化。LINGO-1参与EAE的发生发展过程,尤其是在EAE恢复期对神经髓鞘修复、结构重塑可能发挥重要抑制作用。