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目的:观察烧干蟾水提物( water soluble extract components of roast Toad, WSECRT)对人结肠癌细胞株SW480细胞增殖及凋亡情况的影响;检测烧干蟾水提物对SW480细胞细胞周期的影响,并对其诱导凋亡的相关作用机制进行初步探讨。 方法:设置阴性对照组、华蟾素阳性对照组与WSECRT实验组,以不同浓度的药物作用于结肠癌细胞株SW480,应用倒置显微镜观察药物对SW480细胞形态学的影响;应用噻唑蓝还原法(MTT)检测药物对结肠癌细胞株SW480细胞增殖的抑制作用;应用Hoechst33342荧光染料检测药物对SW480细胞干预后的凋亡情况;应用AnnexinV/PI双染色法检测WSECRT干预SW480后细胞凋亡及坏死的情况;应用流式细胞术分析 SW480细胞经WSECRT作用后其周期分布情况的变化。统计学方法:所有数据用SPSS19.0统计软件进行处理,计量资料采用均数±标准误(mean±S.M.E)表示。采用t检验及单因素方差分析(Fishers LSD test)进行统计学分析。所有统计分析P<0.05表示差异有统计学意义。 结果:(1)经 WSECRT与华蟾素处理后,SW480细胞在10×20倍光镜下的形态学观察可见细胞数目减少,形态变圆,出现伪足,细胞内空泡和颗粒增多,出现大量细胞碎片。(2)WSECRT与华蟾素可显著抑制SW480细胞增殖分裂,相应浓度下WSECRT的抑制作用较华蟾素更为明显。WSECRT0.01、0.05、0.25、1.25、6.25mg/ml作用24h、48h、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为4.194mg/ml、3.064mg/ml与1.710mg/ml,华蟾素0.001、0.005、0.025、0.125、0.625μg/ml作用24h、48h、72h后的IC50(以5-HT计)分别为0.971μg/ml、0.339μg/ml、0.253μg/ml。(3)Hoechst33342染色结果显示WSECRT处理的SW480细胞核蓝染颜色明显加深,出现染色质凝聚和凋亡小体。(4)流式细胞仪检测显示,细胞凋亡与WSECRT呈浓度和时间依赖关系,随着浓度的增加及时间的延长细胞凋亡比例明显增加,与阴性对照差异有统计学意义(*P<0.01)。(5)流式细胞仪检测显示细胞周期发生明显改变,细胞分裂阻滞在S期,与阴性对照组比较差异有统计学意义(*P<0.01)。 结论: (1)WSECRT与华蟾素都可抑制SW480细胞增殖,其抑制程度与时间、剂量呈依赖关系,抑制SW480细胞增殖分裂,相应浓度下WSECRT的抑制作用较华蟾素更为明显。 (2)Hoechst染色显示WSECRT可诱导SW480发生明显凋亡。 (3)流式细胞仪测定显示WSECRT能诱导SW480凋亡,其抑制程度与剂量有依赖关系。 (4)细胞周期检测提示WSECRT干预后细胞出现S期阻滞,提示其凋亡发生可能和S期阻滞相关。