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菜籽粕作为油菜籽加工的副产物具有广阔的应用前景,菜籽粕含有丰富的菜籽蛋白,因此对其深加工研究具有重要的意义。通过碱提酸沉的方法来提取菜籽蛋白,分离冷冻干燥得到的菜籽蛋白利用碱性蛋白酶进行酶解,随后使用3000Da超滤管和SephadexG-15葡聚糖凝胶对制备得到的菜籽蛋白肽进行分离纯化,冷冻干燥制备的菜籽蛋白肽根据不同浓度进行抗氧化性研究,并测其血常规。试验获得主要结果如下: (1)菜籽蛋白的制备:研究了pH值、提取时间、溶液料液比和提取温度作为单因素对菜籽蛋白提取的影响,进一步设计正交试验优化了提取工艺。结果表明:当提取pH值为12、提取时间为1h、溶液料液比为1:15、温度为50℃时,菜籽蛋白提取率为54.77%,纯度为91.77%。氨基酸检测结果表明菜籽蛋白的营养价值较高,含有人体七种必需氨基酸,占菜籽蛋白总氨基酸的29.41%。 (2)菜籽蛋白肽的制备:研究了 pH值、底物浓度、提取温度、提取时间和酶用量作为单因素对菜籽蛋白提取的影响,根据单因素对试验影响主次进一步设计正交试验优化了提取工艺。菜籽蛋白肽提取率为实验标准,优化菜籽蛋白肽提取的工艺流程。试验结果表明:pH值为10.5、底物浓度为3%、提取温度为50℃、提取时间为3h、酶用量3600U/g,菜籽蛋白肽得率为56.87%。而SephadexG-15葡聚糖凝胶对菜籽蛋白肽分离出四种不同相对分子量的肽为八肽、五肽、四肽和三肽分子质量范围为756-783、546-560、425-440和307-329Da。 (3)菜籽蛋白肽抗氧化性研究:体外抗氧化性试验表明,菜籽蛋白肽有较强的还原能力,对超氧阴离子和抑制羟基自由基有着较好的清除能力,体外抗氧化能力随着这菜籽蛋白肽浓度的增加而增强,呈现一定的量效性。体内空氧化性表明,对实验小鼠进行灌胃菜籽蛋白肽100、200、400mg/kg·d30天,发现菜籽蛋白肽可以提升小鼠的抗氧化能力,使小鼠肝脏内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性提高,以及减少丙二醛(MDA)含量并且具有显著影响。在血常规检测中血红蛋白、红细胞、白细胞总数、血小板总数均在正常范围内,血小板总数雄鼠的中剂量组与高剂量组、空白组三者之间均具有极显著性(P<0.01),白细胞总数雌鼠高剂量组与空白组之间具有显著性(P<0.05)。