衰老大鼠皮层和海马区内质网应激相关蛋白的表达变化及竹节参总皂苷的调节

来源 :三峡大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sally2006
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目的:  研究大鼠增龄过程中脑组织皮层和海马区内质网应激相关蛋白的表达变化及竹节参总皂苷(saponins from Panax japonicus,SPJ)的调节作用,为防治脑衰老相关疾病提供实验依据。  方法:  实验一:  将SPF级雄性SD大鼠随机分为6月龄组(6M)、12月龄组(12M)、18月龄组(18M)和24月龄组(24M)组,每组各10只:  (1)用Western blot法检测大鼠脑组织皮层和海马区内质网应激相关蛋白表达水平的变化情况:内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)及其激活的三条通路相关蛋白包括磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(Phosphorylated Protein Kinase R-like ER kinase, p-PERK)、磷酸化真核翻译起始因子2α(Phosphorylated eukaryotic translation initiation factor 2α,p-EIF2α)、活化转录因子4(Activating transcription factor 4,ATF4)、活化转录因子6 ( Activating transcription factor 6 , ATF6 )、磷酸化肌醇必需酶1 (Phosphorylated inositol-requiring enzyme 1,p-IRE1)和X盒结合蛋白1(X box-binding protein-1,XBP1);  (2)通过免疫荧光法检测12月龄SD大鼠脑组织皮层和海马区内质网应激相关蛋白(GRP78、p-PERK、p-EIF2α、ATF4、XBP1)与神经元标记蛋白(NeuN)、小胶质细胞标记蛋白(Iba-1)和星型胶质细胞标记蛋白(GFAP)的共定位情况。  实验二:  将SPF级雄性SD大鼠随机分为6月龄组、24月龄组、SPJ给药组,每组10只。大鼠从18月龄开始给与SPJ剂量分别为10 mg/kg和30 mg/kg,对照组给与生理盐水灌胃至24月龄,每周灌胃6天,持续6个月。用Western blot法检测大鼠脑组织皮层与海马区的内质网应激相关指标(GRP78、p-PERK、p-EIF2α、ATF4、ATF6、p-IRE1、XBP1)和凋亡相关指标p-JNK、CHOP、Bcl-2、Bax等蛋白表达水平的变化情况。  结果:  (1) Western blot结果显示,在SD大鼠脑组织皮层和海马区,内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-EIF2α、ATF4、ATF6、p-IRE1、XBP1的表达随着年龄的增长而逐渐下调;  (2)免疫荧光结果显示,内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-EIF2α、ATF4、XBP1主要与神经元共定位;  (3)Western blot结果显示,与6月龄大鼠相比,24月龄衰老大鼠的内质网应激相关蛋白显著性降低,不同浓度竹节参总皂苷干预6个月后,均能上调内质网应激相关蛋白表达水平,并能降低凋亡相关蛋白p-JNK、CHOP、Bax的蛋白表达水平,上调Bcl-2的蛋白表达。  结论:  自然衰老大鼠皮层和海马区内质网应激相关蛋白表达降低,主要表达在神经元。竹节参总皂苷能上调内质网应激相关蛋白和抗凋亡蛋白的表达,下调促凋亡蛋白的表达,维持衰老大鼠脑组织皮层和海马的内质网稳态。
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