目的：构建含生殖支原体(Mycoplasma genitalium，Mg)p32基因的重组表达载体，在大肠埃希菌(E．coli)中诱导表达，纯化表达产物并研究其在Mg对HeLa细胞黏附过程中的作用，以便从细胞和分子水平进一步探索Mg对宿主细胞的黏附机制。 方法：相关软件分析Mg的p32基因序列，设计特异性引物，以Mg标准株G37为模板行聚合酶链反应(PCR)扩增p32全长843bp片段；经双酶切、连接反应将p32克隆入原核表达载体pET-30a(+)，构建重组质粒pET-30a(+)／P32：连入的p32基因片段经测序鉴定正确后，人工定点诱变该基因中的TGA密码子为TGG；将诱变后测序正确的重组质粒转化入E．coilBL21(DE3)，用IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western blotting分析和鉴定表达结果，Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，BCA法测定其浓度；将G37和纯化的P32重组蛋白(rP32)分别免疫新西兰兔，用所得相应抗血清分别行黏附试验和黏附抑制试验。 结果：PCR扩增出约843bp的目的片段；构建的重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定表明其中插入的目的片段与GenBank上登录的G37的p32基因序列完全一致。通过PCR介导的定点诱变，p32中的TGA被成功突变为TGG。SDS-PAGE分析显示，在IPTG诱导下，重组工程菌中表达了一相对分子量(M_r)约为37.6 KDa的目的蛋白，该目的蛋白在菌体细胞内主要以包涵体形式存在，Western blotting检测其能与G37免疫新西兰兔所得血清发生特异性反应。用