猴腺病毒（Simian Adenovirus,SAdV）属于哺乳动物腺病毒属，与人腺病毒亲缘关系很近，曾在生产用猴肾细胞和脊髓灰质炎减毒疫苗检定中分离出一些SAdV毒株[1、2]。SAdV在实验猴群中高度流行，并存在变种传染给人的风险[3、4、17]。目前国内关于 SAdV感染流行情况的研究很少，现有检测方法如病毒分离培养和用人腺病毒抗原 ELISA检测试剂盒检测，周期长程序复杂、特异性差。　　本实验尝试从两个方面建立 SAdV的检测方法，一是从分子生物学方面，建立针对SAdV核酸的PCR和荧光定量 PCR检测方法；二是从血清学方面，利用表达的重组蛋白和纯化的SAdV抗原，建立针对SAdV-1抗体的检测方法，并建立 SAdV-1的间接免疫荧光检测法。同时，将所建立的检测方法初步应用于实验猴群及相关生物制品中 SAdV的检测。　　通过多序列比对分析已报道的不同亚属 SAdV和鼠腺病毒（MAD）、犬腺病毒(ICH)、禽腺病毒(CELO)基因组序列，选择 SAdV保守性高且与 MAD、ICH、CELO序列有差异区域作为靶序列，针对该区域用Primer Premier5.0设计引物。经过对PCR反应条件进行优化和特异性和敏感性验证，成功筛选出一对特异性好、灵敏度高的引物，目的条带大小为328bp，建立了SAdV的PCR检测方法。结果表明，本方法只需一步 PCR就可以将 SAdV与 MAD、ICH、CELO区分开来，并且能检出不同亚属的猴腺病毒（SAdV-1、SAdV-3、SAdV-20）。所能检测到的最小 DNA模板浓度为47.9pg/mL,比文献报道的引物[5]灵敏度提高100倍。　　用建立的PCR检测方法对我国实验猴群中 SAdV感染情况进行调查。结果发现 SAdV高度流行（阳性率49.2％），主要属于 G亚属和另一新发现的以SAdV-49为代表的分支。食蟹猴感染率高于恒河猴，并从广东地区食蟹猴阳性样本中成功分离出一株 SAdV。经电镜和全基因组测序鉴定，发现该分离株基因组全长为3,3676bp与 G亚属的SAdV-1同源性最高为96%。主要结构蛋白六邻体氨基酸存在变异。六邻体相关蛋白前体 pVⅠ有300bp编码核苷酸缺失。　　找出 G亚属 SAdVpol基因共有保守区域并设计探针引物，制备质粒 pGEM-T Easy-SAdVpol标准品，优化反应条件后，建立了G亚属 SAdV特异的荧光定量PCR检测方法。相关系数、扩增效率、标准差等参数均优于标准，建立的荧光定量 PCR检测方法定量准确、有效。经过特异性、敏感性方法学评价，发现建立的荧光定量 PCR检测方法具有很好的G亚属特异性，检测灵敏度可达6拷贝/μL，灵敏度比常规 PCR方法高10倍，能对SAdV拷贝数准确定量。用该方法对实验猴群及脊髓灰质炎减毒疫苗进行检测，并与常规 PCR检测方法作了比较，发现常规 PCR检测为弱阳性的样本，荧光定量 PCR均能准确定量拷贝数。　　目前腺病毒的研究主要集中在人腺病毒，而对于猴腺病毒六邻体（hexon） Loop1、Loop2区和五邻体的研究尚未见报道。本实验成功构建重组表达质粒pET30a-SAdV L1、pET30a-SAdV L1-L2、pET30a-SAdV P3，用大肠杆菌 BL21(DE3)表达了hexon蛋白的L1区和L1-L2区和五邻体单体 P3，与预期大小相符，经脱盐，镍亲和柱纯化处理，获得了高纯度的目的蛋白。用Western Blot对3种重组蛋白抗原性进行了初步活性鉴定，其中重组蛋白 L1抗原性较好，但与血清中SAdV-1天然抗体的亲和力仍较差。SAdV重组抗原 ELISA检测方法还需后续进一步详细研究。　　采用纯化的BSC-1细胞培养的SAdV-1抗原，建立 SAdV-1抗体的ELISA检测方法。用方阵滴定法确定最适工作条件：包被抗原浓度2.5μg/ml，BSC-1细胞作为正常抗原对照，稀释度1：400（0.52μg/ml），血清稀释度1：100，羊抗猴 IgG酶标记抗体稀释度1：20000。SAdV-1抗体 ELISA检测方法经特异性、敏感性、重复性试验评价，初步应用于实验用猴 SAdV-1抗体的检测。　　建立了SAdV-1抗体检测的间接免疫荧光方法（IFA）。用BSC-1细胞培养的方法制备抗原，通过浓度梯度滴定，待检猴血清的最佳工作浓度为1:10，FITC标记的羊抗猴 IgG抗体的最佳工作浓度为1:250。根据荧光强度可以对猴血清SAdV-1抗体水平进行半定量分析。　　建立的PCR方法经过应用验证具有很好的准确性，能检出不同亚属的SAdV，是较好的SAdV感染的确证方法。利用荧光定量 PCR技术检测 SAdV国内外尚未见报道，可实现对G亚属 SAdV定量特异检测。在国内首次建立了SAdV-1抗体 ELISA检测方法，为SAdV检测标准的制定提供了技术条件。结合免疫荧光检测方法，有利于确定猴群 SAdV感染的真实水平。