论文部分内容阅读
目的:脑胶质瘤(Glioma)是成人最常见的原发性恶性中枢神经系统肿瘤。尽管目前常规综合治疗(手术、放疗、化疗)的方法在不断改善,但疗效仍未得到显著提高。目前研究证实,在脑胶质瘤中存在一些胶质瘤干细胞。它是一种具有无限增殖、自我更新、多向分化等干细胞特性的肿瘤原始细胞,它可能是诱导胶质瘤发生、复发,导致预后较差的原因,因此靶向治疗胶质瘤干细胞将成为研究脑胶质瘤的一大热点。在脑胶质瘤中,作为一条高度保守的信号通路,Wnt/β-catenin信号转导通路是通过调控胚胎生长、发育、能量代谢和干细胞维持等多种生物学过程,在神经系统的发生和形态发育中起重要作用。近年有研究表明FRAT1作为Wnt/β-catenin信号转导通路的重要成员,在多种恶性肿瘤包括神经胶质瘤中过度表达,并且在神经干细胞增殖过程中有重要的调控作用。但目前国内外尚未报道关于该基因与胶质瘤干细胞的相关性研究。本论文旨在研究FRAT1对胶质瘤干细胞体外、体内增殖能力的影响以及探讨其作用机制。方法:通过慢病毒转染技术敲低FRAT1的表达,构建出低表达FRAT1的胶质瘤干细胞模型。采用细胞增殖CCK-8实验,研究FRAT1低表达对胶质瘤干细胞体外增殖能力的影响。采用小动物立体定向仪构建荷瘤鼠模型,并用小动物磁共振和小动物活体成像观察FRAT1低表达对胶质瘤干细胞体内增殖能力的影响。采用Realtime PCR,Western blot和免疫组化的方法检测荷瘤鼠脑胶质瘤组织中FRAT1/β-catenin的m RNA和蛋白表达情况,并研究其相关性。结果:(1)通过慢病毒转染和嘌呤霉素筛选出低表达FRAT1基因的胶质瘤干细胞。(2)CCK-8实验研究证实,敲低FRAT1基因的表达能够下调胶质瘤干细胞的体外增殖能力。(3)小动物磁共振和小动物活体成像研究发现,敲低FRAT1基因的表达能够下调胶质瘤干细胞体内增殖能力。(4)Realtime PCR,Western blot和免疫组化的方法检测发现,随着荷瘤鼠脑胶质瘤组织中FRAT1的m RNA和蛋白水平的下调,β-catenin m RNA和蛋白的水平也相应下降,并且FRAT1与β-catenin表达水平呈正相关。结论:研究表明,在Wnt/β-catenin信号通路中,低表达的FRAT1基因可能通过抑制β-catenin的活性,从而下调胶质瘤干细胞的增殖能力。在靶向治疗胶质瘤干细胞的研究中,分子靶点FRAT1基因将来可能成为一大研究热点。