当归及其不同炮制品多糖的提取、分离纯化和成分分析

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本研究以当归中多糖物质为研究对象,对生当归及其炮制品进行比较分析。采用单因素分析法、正交分析及响应面分析法对当归多糖的提取条件进行优化;然后采用三种方法除蛋白,采用两种方法除色素,并进行比较分析,透析后应用DEAE-52纤维素柱进行分离纯化,然后采用紫外检测法和葡聚糖-100色谱柱层析法对当归多糖不同级成分进行纯度鉴定,然后采用苯酚-硫酸反应、水合茚三酮反应、碘-碘化钾反应、molish反应与斐林试剂反应进行理化性质检验,最后采用薄层色谱法、红外光谱法、气质联用分析法对其进行比较分析;在以上工作的基础上,对生当归及其不同炮制品的多糖进行比较分析;并以甘肃岷县等当归主产区75个样品中所含当归多糖为对象,应用红外光谱进行分析,并采用数据挖掘软件对所得红外光谱数据进行判别分析。实验结果如下:1.当归多糖最佳提取条件是:加水量837.6mL/100g,浓缩后溶液体积为229.12mL,最终含乙醇浓度百分数为65.80%,回流提取时间120min,在此条件下当归多糖的实际得率为10.3972%,和理论预测最佳当归多糖得率相比低0.0433%。2.生当归多糖除蛋白最佳方法为木瓜蛋白酶法结合Sevage法,除色素最佳方法为H2O2法;生当归多糖再经透析、DEAE-52柱层析得到5级成分,其得率分别为:7.6%、18.7%、12.1%、2.65%、23.8%。纯度鉴定结果显示均为均一成分,理化性质检验显示均为糖类物质。薄层色谱分析当归多糖5级成分,显示当归多糖样品中均含有葡萄糖与阿拉伯糖,少许半乳糖。红外光谱分析结果显示生当归多糖中中性糖含量较少,Wasp-5中-COOH成分含量很高,Wasp-5与Wasp-2确定含有吡喃环结构,Wasp-5与Wasp-2确定含有β-型多糖,Wasp-5与Wasp-2确定含有α-型多糖成分。GC-MS分析生当归多糖各级成分为:WASP-1中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比例为0.039:0.295:0.655:0.011;WASP-2中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比例为0.051:0.455:0.053:0.441;WASP-3中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为0.104:0.419:0.099:0.378;WASP-4中单糖组成为葡萄糖与半乳糖,摩尔比例为0.360:0.640;WASP-5中仅含有葡萄糖。3.生当归、酒当归、油当归、土当归、当归炭经提取后,多糖得率依次为8.95%、9.01%、8.78%、7.96%、6.98%。薄层色谱分析表明生当归及其不同炮制品的多糖中均含有葡萄糖与阿拉伯糖,少许半乳糖。红外光谱分析表明各种当归炮制品中酸性多糖成分含量从高到低依次为油当归多糖、当归炭多糖、土当归多糖、生当归多糖、酒当归多糖,吡喃环糖成分含量从高到低依次为生当归多糖、油当归多糖、土当归多糖、当归炭多糖、酒当归多糖,进一步推断出生当归及其不同炮制品中均含有α-型糖苷键与β-型糖苷键,其含量从高到低为当归炭多糖、生当归多糖、油当归多糖、土当归多糖、酒当归多糖。GC-MS分析结果显示生当归中单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为0.509:0.061:0.089:0.341;土当归中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为0.041:0.373:0.032:0.352:0.202;酒当归中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为0.046:0.399:0.023:0.271:0.261;油当归中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为0.043:0.368:0.306:0.283;当归炭中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为0.061:0.454:0.037:0.216:0.232。4.根据红外光谱中差异明显的1800-800cm-1波段光谱数据,采用spssclementine数据挖掘软件中的过滤节点随机抽取60%的样品作为训练集进行炮制品种类判别分析,结果显示判别率高达100%,说明模型建立准确。余下的40%样品作为验证集,应用建好的模型对不同炮制品种类判别分析,结果显示仅有一个产地的土当归判错为生当归,判错率仅为3.2%。
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