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纤维蛋白原(Fibrinogen)是大量存在于血液中的凝结蛋白它是纤维蛋白的前体,也是血液粘稠度和血液凝结的重要影响因素。纤维蛋白原(Fibrinogen)α链C端的605-629氨基酸组成的分子量为2660Da的多肽片段,简称Fib-α[605-629]。近期有美国哈佛大学的研究者报道,利用质谱法进行蛋白质组学分析证明乳腺癌病人血液中的Fib-α[605-629]含量与正常人血液中的含量存在非常显著的差异,乳腺癌病人血液中的该多肽含量要低于正常人的指数,而乳腺癌病人手术后血液中该多肽含量可恢复正常水平。因此该研究建议Fib-α[605-629]多肽可成为乳腺癌诊断及预后恢复情况的一种新的标志物。然而由于缺乏合适的检测工具,该多肽作为乳腺癌标志物的可靠性和临床应用的可行性尚无法得到进一步的验证。
本课题旨在通过利用单克隆抗体技术建立一种ELISA检测方法,对Fib-α[605-629]多肽片段作为新型乳腺癌血液标志物的可靠性和可行性进行论证。我们率先获得了4株来自不同亲本、稳定分泌特异性抗Fib-α[605-629]多肽的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。我们从中挑选出一株亲和力、特异性最好的抗Fib-α[605-629]多肽的单克隆抗体用于ELISA方法的建立。我们通过实验选择出了一种可行的竞争ELISA的方案,利用辣根过氧化物酶(HRP)对该单克隆抗体进行了标记,通过反复测试确定了竞争ELISA检测方法所使用的抗原、抗体的最佳组合,并对包被条件,封闭液,反应时间等实验条件进行了优化。
最后,应用我们建立的竞争ELISA检测方法对90个正常人和89个乳腺癌病人的血清进行了检测,数据分析表明乳腺癌病人血清中的Fib-α[605-629]多肽含量与正常人血清的含量相比有所降低,统计学结果显示差异显著。实验结果表明,Fib-α[605-629]多肽在乳腺癌和正常人血清中含量有显著差异,该多肽有望成为可用于乳腺癌诊断的一种标志物;而且,本实验建立的竞争ELISA检测方法对于乳腺癌疾病的诊断有一定的参考意义。