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目的树突状细胞与胶质瘤共培养,观察胶质瘤细胞诱导树突状细胞凋亡;观察针对BAK的siRNA对树突状细胞凋亡的影响,检测相应的凋亡基因,探讨其可能凋亡通路,为胶质瘤的免疫治疗提供理论依据。方法树突状细胞与胶质瘤细胞通过孔径0.4μm Trans-well共培养,设置空白DC2.4,为对照组,采用MTT法观察其活性,细胞存活率=实验组吸光度/对照组吸光度×100%。采用脂质体的方法转染表达针对BAK的siRNA序列的质粒(A:229序、B:310序、C:579序、D:NC序)进入树突状细胞,并利用G418筛选出稳定表达株,通过western blot和PCR的方法鉴定出稳定表达有效干扰序列的树突状细胞;稳定表达有效干扰序列的树突状细胞和胶质瘤细胞共培养(b组),设置a组空白DC2.4、c组胶质瘤细胞和DC2.4共培养两个对照组,24h后观察树突状细胞凋亡的改变。通过western blot测定相关基因BAK的表达,观察caspase8,caspase3及胞浆中的细胞色素C的变化,进而推断出凋亡的可能通路。结果胶质瘤细胞与树突状细胞共培养后,与空白树突状细胞组相比树突状细胞的活性降低了,吸光值与空白树突状细胞组相比为0.514±0.031;含有siRNA质粒转染入树突状细胞后,各组BAK的表达均降低,以PGPU6/GFP/Neo-BAK-310组为明显。western blot和RT-PCR检测出310序列BAK的表达降低(western blot:A:0.83、B:0.14、C:0.75、D:0.89、未转染:0.92;RT-PCR:A:0.42、B:0.08、C:0.39、D:0.46、未转染:0.49P＜0.05)。稳定表达有效干扰序列的树突状细胞和胶质瘤细胞共培养后,与c组相比树突状细胞的活性较高,树突状细胞的caspase8表达量无明显差异(a:0.78 b:0.75 c:0.77,P＞0.05),caspase3及胞浆中的Cytc减少(caspase3:a:0.67 b:0.70 c:0.2:Cytc:a:0.70 b:0.71 c:0.17 P＜0.05)。结论胶质瘤细胞与树突状细胞共培养以后,可以诱导树突状细胞凋亡,凋亡途径可能是线粒体途径;关于BAK的有效siRNA序列可抑制胶质瘤细胞诱导的树突状细胞的凋亡,为延长树突状细胞的寿命,提高它的抗原呈递能力提供了理论依据。