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背景：视网膜新生血管的发生与缺氧有关，缺氧状态下低氧诱导因子1α(HIF-1a)作为一种关键性的转录因子上调血管内皮细胞生长因子(VEGF)等促血管生成因子的表达，从而促进视网膜新生血管的发生。
目的：从体外研究入手，研究正常氧及低氧环境下，由真核表达载体pSUPER表达的HIF-1α特异性小干扰RNA对HIF-1α表达的抑制效果及由此引起的血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达差异，为后续的活体研究提供体外理论依据。
方法：将pSUPER真核表达载体转染人低分化鼻咽癌细胞CNE2，运用嘌呤霉素筛选建立pSUPERH真核表达载体稳定转染细胞系。采用半定量RT-PCR的方法筛选HIF-1αmRNA抑制效率最高的pSUPER稳定转染细胞系。然后将该细胞系、空载体转染细胞及未转染细胞于正常氧(20％O<,2>)及低氧环境(1％O<,2>)下培养，采用半定量RT-PCR及免疫印迹(Western blot)技术观察正常氧及低氧环境下HIF-1a的抑制效果。并采用半定量RT-PCR及ELISA技术检测相应VEGF的表达差异。
结果：1)建立的pSUPER真核表达载体稳定转染细胞系中，源于六号单克隆细胞的细胞系(clone-6)中HIF-IαmRNA的抑制效果最明显。
2)半定量RT-PCR及Western blot结果表明低氧培养环境下，相对于空载体转染组及未转染细胞组，clone-6中HIF-1α的 mRNA及蛋白质表达水平受到明显抑制。正常氧培养环境下，clone-6中HIF-1α的mRNA表达水平较对照组明显下调，但是蛋白质表达水平较低。
3)低氧环境培养下，clone-6中VEGF mRNA及分泌型蛋白水平较空载体转染组及未转染细胞组有明显下调。而正常氧环境培养下，clone-6中VEGFmRNA及分泌型蛋白水平与对照组比较无明显差异。
结论：在低氧培养环境下，pSUPER真核表达载体能显著抑制HIF-1α的表达，且显著下调VEGF的表达；而正常氧培养环境下，pSUPER对VEGF的表达则无明显影响。因此，pSUPER真核表达载体可能为视网膜新生血管的基因治疗提供新的途径。