论文部分内容阅读
第一部分膀胱癌中hepaCAM 与 p-SMAD2/3表达的相关性目的：研究膀胱癌中肝细胞粘附分子(hepaCAM)与磷酸化SMAD家族蛋白2/3(p-SMAD2/3)表达的相关性。方法：通过免疫组织化学染色(IHC),检测51例膀胱癌和22例癌旁组织中hepaCAM 与 p-SMAD2/3的表达。癌组织的病理参数为：Ta-T1期13例,T2-T4期38例；G1-G2期40例,G3-G4期11例；初发41例,复发10例。结果：IHC显示：膀胱癌组织中hepaCAM表达明显低于癌旁组织(P<0.05),而p-SMAD2/3明显高于癌旁组织(P<0.05)。Spearman相关分析显示hepaCAM与p-SMAD2/3表达呈负相关(r=-0.712/-0.724,P=0.008/0.011),而hepaCAM和p-SMAD2/3的表达与膀胱癌临床病理参数无相关性。结论：膀胱癌中hepaCAM低表达及p-SMAD2/3高表达与膀胱癌的发生、发展密切相关,为探究hepaCAM诱导膀胱癌细胞凋亡的机制提供一定前期基础。第二部分HepaCAM通过SMAD2/3/caspase信号通路诱导膀胱癌细胞的凋亡目的：体外研究膀胱癌细胞中hepaCAM对凋亡的影响及分子机制。方法：通过流式细胞术(FCM)和Hoechst 33258试剂盒检测hepaCAM对膀胱癌细胞株BIU-87和T24凋亡的影响。应用western blot检测hepaCAM过表达腺病毒、caspase抑制剂(V-ZAD-FM K)和SMAD2/3激活剂(TGFp1)处理前后各组hepaCAM口SMAD2/3/caspase通路相关分子的表达。细胞免疫荧光和western blot检测体外过表达hepaCAM后膀胱癌细胞株BIU-87和T24中p-SMAD2/3在胞质和胞核中的表达。结果：HepaCAM可加速膀胱癌细胞BIU-87和T24凋亡。体外过表达hepaCAM可加速caspase3/8/9的活化,下调PARP和p-SMAD2/3的表达。Caspase抑制剂Z-VAD-FMK处理后,与单独Z-VAD-FMK 理组相比, hepaCAM+Z-VAD-FM 4K组可下调caspase3/8/9前体和PARP的表达。SMAD2/3激活剂TGFβ1处理后,与单独TGFβ1组相比,hepaCAM+TGFβ1组可抑制p-SMAD2/3的表达,下调caspase3/8/9 前体和PARP的表达。细胞免疫荧光和western blot显示：过表达hepaCAM可阻止BIU-87和T24中p-SMAD2/3的核转移。结论：HepaCAM可通过SMAD2/3/caspase信号通路诱导膀胱癌细胞的凋亡。