肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的首要因素,据统计90%以上的肿瘤患者死于肿瘤转移而不是原发性肿瘤,肿瘤转移受到众多因素的影响和调控。文献表明电压门控钠离子通道亚型Nav1.7在高转移性前列腺癌Mat-LyLu细胞上特异性高表达,并促进其转移活性,但分子机制尚不清楚。本实验室从我国特有有毒蜘蛛敬钊缨毛蛛和海南捕鸟蛛粗毒中分离并鉴定到了两个作用于Nav1.7的多肽毒素——JZTX-Ⅰ和HNTX-Ⅲ。前期研究表明,两种多肽毒素作用于Nav1.7的效果相反,JZTX-Ⅰ抑制Nav1.7的失活增加钠离子内流,导致Mat-LyLu细胞转移活性增强;HNTX-Ⅲ抑制Nav1.7的激活降低钠离子内流,导致Mat-LyLu细胞转移活性减弱。细胞迁移与侵袭能力检测表明,5μM的JZTX-Ⅰ处理Mat-LyLu细胞24h,使其迁移能力增强50.2%,侵袭能力增强19.0%。5μM的HNTX-Ⅲ处理Mat-LyLu细胞24h,使其迁移能力减弱44.0%,侵袭能力减弱60.1%。本研究以JZTX-Ⅰ和HNTX-Ⅲ作为分子探针,研究增强和减弱Mat-LyLu细胞转移过程中质膜蛋白质的差异表达。我们将纯化的细胞质膜蛋白进行2-DE分离,ImageMaster分析,发现108个差异表达蛋白质点。其中在JZTX-Ⅰ处理组中差异表达的蛋白质为29个,HNTX-Ⅲ处理组中差异表达的蛋白质为79个。这些差异点经胶内酶解,MALDI-TOF/TOF分析,准确鉴定了 64个蛋白质。其中包括与细胞粘附相关的蛋白质,如Annexin、Muskelin 等,与肿瘤相关的蛋白质,如 Cofilin-1、Moesin、Fascin等,与能量代谢相关的蛋白质,如Isocitrate dehydrogenase、Phosphoglycerate kinase、Glutamate dehydrogenase 1 等。我们选取了与肿瘤转移相关的差异表达蛋白Fascin、Muskelin、Annexin A2、Cofilin-1以及Nav1.7做深入的功能和作用机制分析,Western blot检测这些蛋白的表达差异与2-DE结果一致。选取的差异表达蛋白直接或间接地参与调节细胞骨架及其相关蛋白,从而改变细胞的运动性,导致细胞转移能力的增强或减弱。在这一过程中,Rho GTPase信号通路起着中心调控作用。抑制Rac或Rho的活性,均会导致Mat-LyLu细胞转移活性的减弱以及相应的蛋白差异表达。