论文部分内容阅读
1背景与目的结核病仍然是世界公共卫生问题的难题。根据世界卫生组织报告,世界总人口的三分之一曾经或者现在感染过结核杆菌。在发展中国家脊柱结核是最常见的骨结核之一。在最近数十年有很多关于脊柱结核的研究发表,脊柱结核累及椎体和椎间盘,导致脊柱的稳定性尚失,临近椎体和软组织损伤被破坏。虽然脊柱结核在临床上比较常见,但是目前关于脊柱结核所涉及的免疫和炎症反应的机制仍然不清,尤其是椎间盘的破坏过程中细胞和细胞因子在其中的作用。有很多已经表明,白细胞介素家族在结核所导致的炎症和免疫中扮演非常重要的作用,但是否白细胞介素在脊柱结核椎间盘破坏的过程中扮演同样的作用需要进一步的研究。白细胞介素家族有大量的免疫调节蛋白组成,能够参与细胞和组织中的免疫应答,同时也具有促炎和抗炎的作用。少数成员能够作为化学引诱物协同趋化因子帮助T细胞向病灶部位迁移,还有部分成员能够参与细胞对病毒的免疫反应,作用类似于IFNs、TNF和MMPs在脊柱结核中是重要的炎性标志物,因此白细胞介素家族具有成为潜在的治疗靶点的可能。目前关于白细胞介素在脊柱结核椎间盘破坏的病理过程中的作用较少,尤其是在人类的标本组织中更少。基于以上情况,我们选择了白细胞介素家族中具有代表性的白细胞介素包括IL-9,IL-10,IL-12,IL-13,IL-16,IL-17,IL-18,IL-26和IL-27。白细胞分类是基于白细胞自身结构、受体类型和功能分类的。在我们的研究中包括IL-1家族(IL-18),共γ链家族(IL-9),IL-10家族(IL-10、26),IL-12家族(IL-12,IL-27),具有趋化活性细胞因子家族(IL-16)和IL-17家族。因此研究上述白介素将有助加深我们对脊柱结核椎间盘破坏机制的研究。2方法2.1脊柱结核组:2013年1月至2014年12月在广西医科大学第一附属脊柱骨病外科确诊为脊柱结核,有行病灶清除,神经减压,植骨融合的手术适应症并且进行该手术的患者,共计70例。椎间盘突出组:2013年1月至2014年12月在广西医科大学第一附属脊柱骨病外科确诊椎间盘突出症,有行椎间盘切除手术适应症并且已经行该手术的患者,共计70例。正常组(control group):2013年1月至2014年12月在广西医科大学第一附属脊柱骨病外科确诊脊柱骨折,有行椎间盘切除手术适应症并且已经行该手术的患者,共计10例。实验样本获得以后,由两名经验丰富的病理学家对组织标本进行检查,确保样本的准确性。所有样品由外科手术获得后,立即放入液氮中冷冻并保存直至进行组织RNA提取。2.2采用组织RNA提取技术、逆转录技术和实时荧光定量PCR(Real time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)技术,研究分析IL-9,IL-10,IL-12,IL-13,IL-16,IL-17,IL-18,IL-26和IL-27的m RNA转录水平在结核性椎间盘组织、退行性椎间盘组织和正常椎间盘组织内的表达情况以及差异性。通过Spearman秩相关分析ILs表达的配对相关性。2.3采用临床问卷调查与实验室检查相结合的方式进行相关资料的采集。结合ILs基因表达数据,分析研究各项基因表达指标与脊柱结核临床资料之间的相关性3结果3.1研究数据表明在脊柱结核组IL-10,IL-16,IL-17,IL-18和IL-27的m RNA表达显著高于对照组(P<0.05)。脊柱结核组中IL-10,IL-16,IL-18和IL-27m RNA表达显著高于椎间盘突出组(P<0.05)。脊柱结核组中患者的炎症反应指标越高IL-16,IL-17和IL-18的m RNA表达越高,IL-10和IL-27越低(P<0.05)。3.2实验结果表明在脊柱结核和椎间盘突出组中多种白介素mRNA的表达具有相关性,在脊柱结核组中IL-18的m RNA表达水平与IL-16和IL-17正相关,IL-10和IL-27的m RNA表达水平与IL-16,IL-17和IL-18m RNA表达水平负相关,IL-16的m RNA表达水平与IL-17的m RNA表达水平具有正相关,IL-10的m RNA表达水平与IL-27的m RNA表达水平具有正相关。3.3实验结果表明性别、病灶部位与ILs的表达没有统计学差异,在脊柱结核组和椎间盘突出组中IL-18的m RNA的表达水平与年龄具有正相关(P=0.023、P=0.007)。吸烟习惯与IL-17的m RNA的表达水平具有正相关、与IL-10的m RNA的表达水平具有负相关(P=0.008,P=0.041)。VAS评分能够影响IL-10,IL-16,IL-17,IL-18和IL-27的m RNA的表达水平(P=0.009,P=0.007,P=0.034,P=0.016,P=0.008)。VAS评分在8-10时,L-16,IL-17和IL-18的m RNA表达水平比VAS评分在0-4时高。病情的持续时间能够影响IL-10,IL-16,IL-17,IL-18和IL-27的m RNA表达水平(P=0.014,P=0.033,P=0.037,P=0.006和P=0.009),病程在3–12月时IL-16,IL-17和IL-18的表达较病程<3月时高,IL-10和IL-27的m RNA表达水平较病程<3月时低。CRP和ESR能够影响IL-10,IL-16,IL-17和IL-27的m RNA表达(CRP:P=0.018,P=0.007,P=0.024,P=0.009;ESR:P=0.037,P=0.041,P=0.003,P=0.008)。CRP>30 mg/L时,IL-16和IL-17的m RNA表达较高,CRP<10mg/L时,IL-10和IL-27的m RNA表达较高。ESRs>40 mm/h时,IL-16和IL-17 m RNA表达较高,ESRs<20 mm/h时,IL-10和IL-27的m RNA表达较高。4结论1.在本实验中证实在脊柱结核椎间盘组织中IL-10、IL-16、IL-17、IL-18和IL-27的m RNA有表达,在脊柱结核的病理过程中IL-16、IL-17和IL-18可能参与了脊柱结核的免疫激活并且介导了脊柱结核椎间盘的细胞外基质的破坏。在本实验中证实在椎间盘突出症患者病灶部位椎间盘组织中IL-17、IL-27的m RNA有表达,推测IL-17、IL-27可能通过调控炎症反应介导椎间盘的退变。2.在本实验中证实在脊柱结核椎间盘组织中IL-10、IL-16、IL-17、IL-18和IL-27的m RNA的表达水平相互之间具有相关性,推测在脊柱结核的炎症免疫反应过程是多种细胞因子协同调节的结果。3.在本实验中证实在脊柱结核椎间盘组织中IL-18的m RNA表达水平与年龄的大小具有相关性,推测IL-18可能参与椎间盘的破坏和退变。4.在本实验中证实在脊柱结核椎间盘组织中IL-10和IL-17的m RNA表达水平与脊柱结核患者的吸烟习惯和吸烟的量有相关关系,推测IL-10和IL-17可能参与尼古丁等物质对椎间盘的破坏。5.在本实验中证实在脊柱结核椎间盘组织中IL-16、IL-17和IL-18的m RNA表达水平与VAS评分具有正相关。脊柱结核椎间盘组织中IL-10和IL-27的m RNA表达水平与VAS评分具有负相关。推测白介素可能通过调控炎症免疫反应加重疼痛。6.在本实验中证实在脊柱结核椎间盘组织中IL-16、IL-17和IL-18的m RNA表达水平与病程长短具有正相关。脊柱结核椎间盘组织中IL-10和IL-27的m RNA表达水平与病程长短具有负相关。推测白介素可能通过调控炎症免疫反应影响患者的愈后。7.在本实验中证实在脊柱结核椎间盘组织中IL-16和IL-17的m RNA表达水平与CRP、ESR具有正相关。脊柱结核椎间盘组织中IL-10和IL-27的m RNA表达水平与CRP、ESR具有负相关。推测多种白介素在脊柱结核的炎症反应中发挥作用,并且炎症反应的不同阶段不同白介素的作用不同。