柞蚕HSP70基因的克隆和序列分析

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热休克蛋白(heat shock protein)是在从细菌到哺乳动物中广泛存在一类热应急蛋白质。当有机体暴露于高温时,就会激发合成此种蛋白来保护有机体自身,发挥着重要的生物学功能。HSP70是热休克蛋白家族中最重要的一员,被称为主要热休克蛋白,由HSP70基因家族编码。目前热休克蛋白在果蝇、摇蚊、烟草夜蛾、美洲大蠊、飞蝗、蜜蜂、褐飞虱等昆虫中已得到了广泛研究,部分功能也已被证实。然而热休克蛋白70基因的结构及其功能尚不清楚。柞蚕(Antheraea pernyi),属鳞翅目大蚕蛾科昆虫,因喜食柞树叶得名,茧可缫丝,主要用于织造柞丝绸。基于探究柞蚕体内热休克蛋白70基因在柞蚕体内的分子作用机制,本实验采用RT-PCR方法首次克隆获得了柞蚕热休克蛋白70基因的基因序列(GenBank登录号:GU945199),该片段的序列长1905bp。生物信息学分析表明,该序列共编码634个氨基酸,预测蛋白的等电点和分子量大小分别为5.62和69.5kD,且柞蚕HSP70氨基酸序列具有昆虫HSP70的保守性结构特征。序列分析表明,柞蚕HSP70与与天蚕(Antheraea yamamai,AB179657.1)、家蚕(Bombyx mori)、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)、棉铃虫(Heliothis viriplaca)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、烟草天蛾(Manducasexta)、膜翅目寄生蜂(Cotesiarubecula)、大鼠(Rattus norvegicus)、斑马鱼(Daniorerio)、果蝇(Drosophilamelanogaster)、人(Homo sapiens)HSP70等11个物种的HSP70基因核苷酸序列的同源性分别为95.7%、78.5%、76.1%、77.3%、76.6%、74.7%、65.9%、65.7%、66.7%、64.2%、45.2%;氨基酸序列同源性分别为98.11%、92.9%、90.8%、88.3%、91.3%、88.3%、72.7%、73.3%、72.3%、71.5、31.5%。可以看出:同属鳞翅目昆虫的柞蚕、天蚕、家蚕、甘草夜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾和烟草天蛾的HSP70基因的核苷酸序列的同源性在70%以上,氨基酸序列的同源性在80%以上。根据HSP70一级结构序列构建的系统进化树表明,柞蚕与天蚕、家蚕、烟草天蛾及甜菜夜蛾的亲缘关系较近。
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