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由于具有被动靶向或单个配体主动靶向特性的纳米颗粒(nanoparticles,NPs)的靶向效率不理想,肝细胞癌的有效治疗(hepatocellular carcinoma,HCC)仍然面临着巨大的挑战。尽管基于双配体靶向机制的策略在一定程度上可以提高HCC靶向效率,但是大多数报道的具有双配体靶向性质的NPs通常都需要经历多步化学设计、合成和纯化程序,导致批次间差异和可扩展性生产方面的困难。因此,针对HCC的精准治疗和潜在的临床转化,亟需开发一种简便而有效的双配体靶向NPs,本文中,将叶酸(folic acid,FA)作为疏水性和靶向性片段引入亲水性大分子前药半乳糖基化壳聚糖-5-氟尿嘧啶乙酸(GC-FU)中,合成FA-GC-FU聚合物前药。该聚合物前药可以由FA和聚合物部分的溶解度差异驱动其在水相中自组装形成NPs,而无需使用物理交联剂用于自组装。所制备的纳米颗粒(FA-GC-FU)可以分别通过NPs表面上的FA和乳糖酸(lactobionic acid,LA)残基靶向HCC细胞表面上过表达的去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)和叶酸受体(folate receptor,FR),从而实现在体内、外HCC的靶向效率最大化,使正常肝细胞的非特异性摄取最小化。因此,本研究不仅为制备具有双重配体靶向的NPs制定了简单而有效的策略,也为HCC提供了精准治疗的平台,具有良好的临床转化潜力。第一部分:通过酰胺缩合反应将疏水性叶酸与亲水性大分子前药GC-FU偶联制备得到FA-GC-FU聚合物前药,该聚合物前药可以由FA和聚合物部分的溶解度差异驱动其在水相中自组装形成NPs。通过~1H-NMR确定FA-GC-FU的化学结构,透射电镜(TEM)观察FA-GC-FU的形貌特征,马尔文纳米粒度仪检测FA-GC-FU的粒径分布。证实FA与GC-FU成功偶联以及FA的引入驱动球形NPs的形成。紫外分光光度法测得其载药量为21.22±1.10%。评价FA-GC-FU的稳定性及药物释放特性。证实FA-GC-FU具有良好的稳定性和持续的药物释放特性。第二部分:评估FA-GC-FU的生物相容性。分别通过溶血试验、BSA蛋白吸附实验检测FA-GC-FU的血液相容性;通过人正常肝细胞L02细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞的增殖抑制实验评估FA-GC-FU的细胞相容性。实验结果证实与游离5-FU相比,FA-GC-FU具有良好的生物相容性。第三部分:采用FR和ASGPR过表达的肝癌细胞SMMC-7721细胞的细胞增殖抑制实验、竞争结合实验、细胞凋亡和周期实验、抗癌细胞转移实验;以及对SMMC-7721细胞和人非小细胞肺癌细胞A549细胞(FR和ASGPR低表达)的细胞摄取实验,验证FA-GC-FU的体外抗肿瘤作用及靶向性。结果表明FA-GC-FU呈现最佳的肝癌细胞增殖抑制效果,证实叶酸诱导NPs形成的同时仍然具有靶向性,且FA-GC-FU在通过FR和ASGPR介导内吞以增加细胞摄取方面发挥协同靶向作用。同时,相较于游离5-FU,FA-GC-FU能够显著诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期;在体外,非细胞毒性浓度时FA-GC-FU具有良好的抗癌细胞转移能力。第四部分:建立SMMC-7721肝癌细胞荷瘤裸鼠BALB/c肿瘤模型进行FA-GC-FU体内抗肿瘤作用实验,评估FA-GC-FU体内抗肿瘤作用,结果显示与游离5-FU相比,FA-GC-FU能够最大程度抑制肿瘤生长,同时对荷瘤裸鼠组织的组织切片以及生化指标检测评估FA-GC-FU的体内毒性作用,证实FA-GC-FU能够减轻化疗药物5-FU的毒副作用。因此,FA-GC-FU被证实是用于治疗肝细胞癌更有效、更安全的方式。结论:我们通过将FA与亲水性大分子前药GC-FU偶联成功制备具有双重配体靶向的NPs(FA-GC-FU)。该制备过程简单易行,制备得到的FA-GC-FU显示出具有良好的生物相容性,同时与游离5-FU和单配体靶向的纳米颗粒(GC-FU)相比,双配体靶向FA-GC-FU表现出更强的体内、外HCC治疗效果。