1997年,klinefelter GR报道硝基咪唑类及其衍生物影响大鼠的生育力。进一步分析发现这类化学物质使得大鼠精子表面的一种蛋白脱落,导致精子活力不足。klinefelter GR将之命名为精子蛋白SP22(sperm protein 22)。SP22是广泛表达的蛋白,在各组织中均有表达。在不同物种中均存在同源蛋白,且同源性极高。与人的致癌基因DJ1,转录因子RS同源性均在90%以上。与大鼠精子基因CAP1为同一基因。SP22的广谱表达,及在各物种中的极高同源性说明SP22是由一持家基因编码,对生命活动至关重要,所以在长期进化中其序列得以高度保守。 SP22蛋白具有多种功能。SP22抗体在大鼠体内外均能在卵子透明带水平上阻断精子与卵子的结合。推测SP22直接参与顶体反应。蛋白结构研究显示SP22是一种酶,它能酶解卵子透明带帮助精子穿入卵子。SP22与致癌因子DJ1的极高同源性也说明SP22是种酶。存在于脑中的DJ1参与抗氧化机制。DJ1可与脑中具有氧化性的代谢产物结合并分解。DJ1的突变使得脑中的氧化物过多积累便导致疾病的发生。DJ1的一个氨基酸突变可直接引起早年型帕金森的发生。SP22与转录因子RS极其相似,存在于核内外。在有丝分裂时部分SP22转入核内。但它不具有核内定位序列,由其它核内蛋白带入。在核内间接结合于核酸核蛋白RBS上。SP22可能是一个调节因子而并不是转录因子,参与细胞增殖过程。它与ras因子结合时具有强致癌活性,能导致大鼠NIH3T3细胞癌变。 近年来对SP22研究渐深入,但仅限于以动物实验阶段,针对人睾丸中SP22及在男性生殖系统中的分布定位分析国内外未见相关报道。因此本实验研究以人睾丸组织中的SP22基因为研究对象,通过RT—PCR进行cDNA克隆,导入克隆T载体进行DNA测序。所测得序列与大鼠及相关同源性基因进行比较分析。所得基因正是人源SP22基因,进一步证明SP22在进化过程中具有高度保守性。将大量扩增所获得的人睾丸SP22基因亚克隆到表达载体pET-28(a)、pHIL-S1中,导入基因工程菌大肠杆菌BL21、毕赤氏酵母GS115进行体外表达。分别在重组大肠杆菌包涵体沉淀,重组酵母菌培养液上清中检测出所表达的外源蛋白。将表达出的蛋白进行纯化。原核与真核表达的重组蛋白N端都带有6个组氨酸的His-tag(+),通过镍离子亲和层析纯化。再对所得蛋白进行鉴定分析。比较分析