【摘 要】
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日本乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）简称乙脑,是一种严重的人畜共患病及虫媒性病毒病。本研究旨在构建递呈JEV E蛋白主要抗原的大肠杆菌外膜囊泡（Outer membrane vesicle,OMV）并评价其免疫效力,探究其作为新型候选疫苗的潜力,为研究JEV亚单位疫苗提供了新的开发思路。首先,构建能够表达JEV抗原蛋白的重组大肠杆菌。本研究保证氨基酸序列不变,设计出密码
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日本乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）简称乙脑,是一种严重的人畜共患病及虫媒性病毒病。本研究旨在构建递呈JEV E蛋白主要抗原的大肠杆菌外膜囊泡（Outer membrane vesicle,OMV）并评价其免疫效力,探究其作为新型候选疫苗的潜力,为研究JEV亚单位疫苗提供了新的开发思路。首先,构建能够表达JEV抗原蛋白的重组大肠杆菌。本研究保证氨基酸序列不变,设计出密码子优化的串联基因Ez（855bp）和E基因（1539bp）。以大肠杆菌JC8031作为表达菌,pBAD-18-ClyA作为表达载体,经终浓度为0.2%阿拉伯糖诱导后,重组大肠杆菌能够表达两组融合蛋白,大小约为71KDa和64KDa。其次,制备能够递呈表达JEV抗原蛋白的重组大肠杆菌OMV。重组大肠杆菌诱导20h后低速离心分离上清,后超速离心收集上清中OMV,密度梯度纯化后进行浓缩。电镜观察收集到的重组OMV直径在20-200nm之间;Western-blot鉴定显示重组OMV包含JEV抗原蛋白。最后,证实大肠杆菌重组OMV具有较好的JEV免疫保护效果。以重组OMV免疫小鼠,对其进行JEV抗体检测、攻毒保护率、体液免疫和细胞免疫等方面的评价。结果显示免疫后可以产生高水平的特异性IgG抗体（最高OD450nm=1.1725）;攻毒试验结果表明免疫后可对致死量JEV产生不同水平保护效果,75μg剂量时保护率最高为90%;淋巴细胞增殖水平和细胞因子分泌水平显著上升,同抗体亚型分类结果表明重组OMV主要诱导机体Th1型免疫应答;最优组中和抗体平均滴度为1:8。
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