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糖尿病是严重威胁人类健康的疾病,2014年全球糖尿病患者已达3.87亿,占成人比例的8.3%。糖尿病并发症高达100多种,严重危害人们健康并造成极大的社会经济负担。与常规外源胰岛素替代或严密监控血糖的胰岛素泵相比,胰岛移植能更精确调控血糖波动,显著降低低血糖风险,并能有效纠正C肽及脂肪代谢紊乱,最终减少微血管及神经损伤,避免糖尿病肾衰、心血管疾病等各种远期并发症。随着糖尿病发病率的迅速增加及带来的重大经济负担,功能胰岛移植治疗糖尿病越来越受到重视,是目前最有希望治愈糖尿病的途径。但是由于胰岛供体的严重不足,异种或同种异体胰岛的免疫排斥等问题,极大的限制了胰岛移植在临床中的应用。 围绕胰岛移植问题,本论文从两个方面进行了研究: 其一,在胰岛移植应用到临床之前,需要建立胰岛冷冻保存库。目前制约细胞库发展的技术环节仍然是冷冻过程中对细胞的损伤问题,包括冰晶和溶质性损伤,对细胞和细胞间质造成致命影响。第一部分拟采用先进的玻璃化冻存方法,使用高浓度的冷冻保护剂和快速降温,可避免冷冻过程中冰晶的产生。但是玻璃化冻存过程涉及多种因素,包括保护剂的组分和浓度,预平衡的时间和步骤,降温及复温的速率等,现有研究中所使用的试验方法均是单因素试验来实现,难以达到优化设计,本文应用响应面方法中的三步设计法对冻存过程中的6种因素进行筛选,确定三种最显著影响因素,建立回归模型。通过对自变量的合理取值,求得使指标最优的值,达到胰岛冻存的最佳效果。 其二,扩大胰岛来源,间充质干细胞(MSCs)是可自我复制的多潜能细胞,在体外特定诱导条件下可定向分化为胰岛素分泌细胞,且表达胰岛素细胞发育相关基因。以往研究多采用平面二维细胞培养体系,诱导MSCs呈单层生长和分化,与体内细胞生理环境所处的三维环境显著不同,存在胰岛细胞分化效率低,胰岛功能不够成熟等问题。本部分拟使用海藻酸盐三维体系在体外特定培养条件下,考察MSCs诱导分化为胰岛样细胞的效果,检测诱导后细胞的胰岛相关功能和基因表达情况,初步考察凝胶基质刚度对于MSCs分化的影响,以期提高MSCs向胰岛样细胞分化效率,并推动胰岛移植治疗糖尿病的临床应用。