【摘 要】
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目的探讨和厚朴酚抑制膀胱尿路上皮癌细胞增殖中的作用及同源盒基因HOXA9在其中的意义。方法培养膀胱尿路上皮癌T24细胞株,在不同浓度和厚朴酚处理条件下,运用流式细胞技术分析凋亡及细胞周期的变化,利用CCK8、集落形成、划痕实验等方法测定细胞增殖能力的变化,利用蛋白质印迹技术测定HOXA9、增殖细胞核抗原(PCNA,Proliferating Cell Nuclear Antigen),及凋亡相关蛋
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目的探讨和厚朴酚抑制膀胱尿路上皮癌细胞增殖中的作用及同源盒基因HOXA9在其中的意义。方法培养膀胱尿路上皮癌T24细胞株,在不同浓度和厚朴酚处理条件下,运用流式细胞技术分析凋亡及细胞周期的变化,利用CCK8、集落形成、划痕实验等方法测定细胞增殖能力的变化,利用蛋白质印迹技术测定HOXA9、增殖细胞核抗原(PCNA,Proliferating Cell Nuclear Antigen),及凋亡相关蛋白Bad、Bcl-2(B-cell lymphoma-2)、Cleaved-caspase3的表达水平。收集人体正常膀胱组织、非肌层浸润性低级别膀胱尿路上皮癌和高级别膀胱癌的临床标本,通过免疫组织化学染色法检测HOXA9表达情况。结果和厚朴酚可以剂量和时间依赖方式,抑制T24细胞的增殖,并诱导其凋亡。随药物浓度的增加(25μmol/L、30μmol/L、35μmol/L)和时间的推移(24h、48h),对T24细胞抑制生长增殖及诱导凋亡的作用亦呈增强趋势,凋亡相关蛋白Bad及蛋白Cleaved-caspase3的表达水平升高,而Bcl-2、PCNA的表达水平降低。同时,和厚朴酚可以增强T24细胞中HOXA9表达水平,降低NF-kB信号通路中磷酸化的P65的表达水平。进一步的实验显示:沉默HOXA9明显减弱了和厚朴酚对T24细胞增殖的抑制作用,并能逆转磷酸化P65表达水平的下降。结论和厚朴酚可抑制膀胱尿路上皮癌细胞生长、增殖,可能与HOXA9表达增高及磷酸化的P65表达下降有关。
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