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目的以前列腺癌细胞系DU145细胞为研究模型,研究死亡盒蛋白5(Dead-box polypeptide 5,DDX5)对CCAT2 G型与T型启动子活性的影响,探讨DDX5对长链非编码基因CCAT2的转录调控机制。方法培养DU145细胞,提取RNA逆转录为cDNA,设计DDX5引物,PCR扩增DDX5编码序列DNA片段。将目的片段连接到pGM-T载体上,琼脂糖凝胶电泳以及测序验证,并与NCBI数据库比对。将验证正确的DNA片段亚克隆到pcDNA6表达载体中,命名为pcDNA6-DDX5。将pcDNA6-DDX5表达质粒转染DU145细胞,通过qPCR以及Western blot验证DDX5的mRNA及蛋白表达水平。用CCAT2启动子驱动的报告基因质粒与pcDNA6-DDX5质粒共转染DU145细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性,qPCR检测CCAT2 RNA的表达。设计并合成DDX5的siRNA,qPCR及Western blot验证siRNA的有效浓度。将针对DDX5的siRNA片段与CCAT2启动子驱动的报告基因质粒共转染DU145细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。构建pGL3-153Ts-Rluc质粒。双荧光素酶报告基因系统检测CCAT2 G/T启动子活性比率。结果成功构建DDX5的真核表达质粒pcDNA6-DDX5。pcDNA6-DDX5质粒转染DU145细胞,qPCR及Western blot结果显示,DDX5 mRNA及蛋白的表达水平升高。双荧光素酶报告基因结果显示,相比较阴性对照组,转染pcDNA6-DDX5质粒组,CCAT2 G型启动子的相对活性升高(P<0.05),CCAT2 T型启动子的相对活性降低(P<0.05)。pcDNA6-DDX5质粒转染DU145细胞,qPCR结果显示,总CCAT2 RNA和G型CCAT2 RNA相对表达量升高(P<0.05),U型CCAT2 RNA相对表达量降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,相比较阴性对照组,敲低DDX5组,CCAT2 G型与T型启动子活性均降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,相比较阴性对照组,过表达DDX5组,CCAT2 G/T启动子活性比率升高(P<0.05),siDDX5组,CCAT2 G/T启动子活性比率降低(P<0.05)。结论在前列腺癌DU145细胞中,死亡盒蛋白5对CCAT2 G型启动子的活性有激活作用。图12幅;表8个;参137篇。