背景目的：类风湿性关节炎(rheumatid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病,滑膜炎持久反复发作,可导致关节内软骨和骨的破坏,关节功能障碍,本病发病以青壮年为多,预后欠佳,致残废率高,严重危害广大人民的身体健康,目前采取的治疗方案,虽然可以改善症状,减轻炎症,但最终均未能有效地防止骨侵蚀,阻断病程进展,且长期应用副作用大,到目前为止,西医药治疗本病仍无较为理想的方法。本病属于中医学“痹证”、“历节”、“鹤膝风”等范畴。中医药治疗本病一般以辨证论治为主,通过多层次、多环节、多途径、多靶点共同作用,抗炎镇痛,调节免疫功能,阻止病变发展,具有较大优势。本课题以医院制剂双藤痹痛酊为研究对象,通过体内和体外实验,观察双藤痹痛酊对关节滑膜的保护作用,并探索其作用机理。方法：1.抗炎作用实验：建立二甲苯致小鼠耳肿胀、棉球肉芽肿、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加及角叉菜胶致大鼠足肿胀,考察双藤痹痛酊对多种急慢性炎症的影响：2.镇痛实验：应用热板法、醋酸致小鼠扭体反应慢性疼痛等模型,考察双藤痹痛酊镇痛作用。3.对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠的影响：建立胶原诱导性关节炎(CIA)模型,观察双藤痹痛酊对大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎评分、大鼠关节肿胀度及对组织病理学评分的影响,并结合酶联免疫、免疫组化、蛋白免疫印迹、逆转录聚合酶链式反应等方法,考察双藤痹痛酊对CIA大鼠转录核因子(NF-KB)炎症信号转导通路相关因子的影响。4.对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的影响：分离培养原代滑膜细胞,观察双藤痹痛酊对原代滑膜细胞的增殖作用及对LPS诱导产生的IL-1β等因子的作用。结果：1.抗炎作用试验：(1)二甲苯致小鼠耳肿胀实验：双藤痹痛酊各个剂量组致炎耳质量差值均小于模型组,与模型组相比,双藤痹痛酊中、高剂量有显著性差异(P<0.05或P<0.01)：(2)棉球肉芽肿实验：双藤痹痛酊各个剂量组肉芽组织质量均小于模型组,其中高剂量组和中剂量组与模型组相比,有显著性差异(P<0.05或P<0.01)；(3)醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验：双藤痹痛酊各个剂量组腹腔冲洗液OD值均小于模型组,其中高剂量组与模型组相比,有显著性差异(P<0.05);(4)角叉菜胶致大鼠足肿胀实验：双藤痹痛酊各个剂量组足肿胀值均低于模型组,高剂量组致炎后1h、2h、4h、6h足肿胀与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01),中剂量组致炎后2h、4h足肿胀与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01),低剂量组致炎后1h、2h足肿胀与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。2.镇痛试验：(1)热板法实验：与空白组比较,双藤痹痛酊各剂量组疼痛反应出现时间均延长(P<0.05或P<0.01),其中高剂量组作用在给药后0.5h、1h、2h均有非常显著性意义;(2)与模型组比较,双藤痹痛酊高、中、低剂量组疼痛反应出现时间稍延长,15min内扭体次数明显减少(P<0.01)。3.对II型胶原诱导性关节炎大鼠的影响实验：双藤痹痛酊各剂量组关节炎指数、足肿胀度均小于模型组,与模型组相比双藤痹痛酊各剂量均改善踝关节滑膜组织炎性浸润及增生等炎症反应,其中高剂量组与模型组相比有显著性差异(P<0.05或P<0.0l)。双藤痹痛酊各剂量组血清及组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6、IL-8等含量均小于模型组,与模型组相比具有显著性差异(F0.05或P<0.01)；TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、TLR4、MyD88、NF-κB、IKκ、P-IκB蛋白及mRNA表达,双藤痹痛酊各剂量组均低于模型组,其中高剂量组降低最显著(P<0.01);IκB蛋白及mRNA表达,双藤痹痛酊各剂量组均升高,其中高剂量组降低最显著(P<0.01)：4.对II型胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的影响：双藤痹痛酊0.5、1mg/mL组和MTX组大鼠滑膜细胞A值均低于对照组,其中1mg/mL组和MTX组显著降低A值(P<0.05或P<0.01)；与对照组比较,给药组TNF-α、IL-1β水平均降低,IL-10水平升高,其中双藤痹痛酊1mg/mL组及MTX组TNF-α、IL-1β水平显著降低而IL-10水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论：1.双藤痹痛酊能抑制二甲苯所致的耳肿胀、抗肉芽组织形成、抑制醋酸制小鼠腹腔毛细血管通透性的增高、抑制角叉菜胶致足肿胀.说明双藤痹痛酊对急性炎症反应和慢性炎症增生作用具有一定的抑制作用。2.双藤痹痛酊给药后提高痛阈百分率、减少醋酸所致小鼠扭体反应次数.提示双藤痹痛酊具有一定的镇痛作用.3.双藤痹痛酊给药后能抑制CIA大鼠足肿胀,改善躁关节滑膜组织炎性浸润及增生等炎症反应,调整TLR4/NF-KB炎症信号转导网络及相关因子,降低滑膜组织TLR4、MyD88、NF-κB、IKκ、P-IκB表达及血清及滑膜组织中TNF-α、IL-6、IL-8含量,可能是双藤痹痛酊的抗炎镇痛及抗类风湿关节炎的部分作用机制.4.双藤痹痛酊可抑制CIA大鼠滑膜细胞的增生,降低滑膜细胞培养液中TNF-α、IL-1β水平,升高滑膜细胞培养液中IL-10水平。