龙枝配伍促H22荷瘤小鼠肿瘤细胞及人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用的研究

来源 :黑龙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kaishizai2009
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目的探究尖叶假龙胆与半枝莲配伍对人肝癌细胞Bel-7402及H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的促凋亡作用。方法体外实验:体外培养人肝癌细胞Bel-7402,制备尖叶假龙胆、半枝莲及各配伍组含药血清。实验分为空白组、尖提组、半提组、1:1组、2:1组、1:2组及阳性药组:采用MTT法检测各组细胞OD值并计算细胞增殖抑制率;应用流式细胞技术检测各组细胞凋亡率及细胞周期分布。体内实验:建立H22荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、尖提组、半提组、1:1组、2:1组、1:2组、阳性药组及空白对照组:观察各组小鼠一般生存状态,测量瘤重并计算抑瘤率;各组瘤组织包埋切片处理后进行HE染色、TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡情况;通过免疫组化检测肿瘤组织内Bax、Bcl-2,caspase-3表达水平。结果1.体外实验1.1MTT法检测结果显示,与空白组比较,各给药组均能抑制Bel-7402细胞增殖,各中药组中2:1组抑制率最高。1.2流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示,与空白组比较,各给药组均能诱导Bel-7402细胞凋亡,各中药组中2:1组细胞凋亡率最高。1.3流式细胞仪检测细胞周期分布结果显示,与空白组比较,各给药组均能将Bel-7402细胞阻滞在G0/G1期而阻碍细胞增殖,各中药组中2:1组细胞周期阻滞最明显。2.体内实验2.1观察各组小鼠一般状态发现,模型组小鼠状态最差,体重减轻明显,且肿瘤增长迅速。与模型组比较,各给药组肿瘤增长均减缓,且各中药组体重增加明显,较空白组无差异。2.2测量各组小鼠瘤重并计算抑瘤率结果可知,各给药组均能抑制肿瘤生长,各中药组中2:1组抑瘤率最高。2.3HE染色结果显示,与模型组肿瘤细胞紧密排列的形态比较,各给药组肿瘤细胞排列疏松,有明显的抑制效果,各中药组中1:1组与2:1组抑制效果较明显。2.4TUNEL法检测结果显示,与模型组比较,各给药组视野内细胞凋亡率均升高,各中药组中2:1组细胞凋亡率最高。2.5免疫组化检测Bax、Bcl-2结果显示,与模型组比较,各给药组均能上调Bax水平,下调Bcl-2水平,增大Bax/Bcl-2,各中药组中1:1组和2:1组调控效果较显著。2.6免疫组化检测活化的caspase-3水平结果显示,与模型组比较,各给药组均能上调活化的caspase-3水平,各中药组中2:1组效果最显著。结论1.尖叶假龙胆配伍半枝莲醇提物含药血清有抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖,促进其凋亡、影响其细胞周期分布的作用,其中龙枝配伍2:1组效果最佳。2.尖叶假龙胆配伍半枝莲可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤细胞生长,诱导其凋亡,并改善肿瘤对小鼠一般状态的影响,其中龙枝配伍2:1组效果最佳。3.尖叶假龙胆配伍半枝莲可通过调控Bax与Bcl-2及活化的caspase-3水平来实现促进细胞凋亡的作用。
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