DAPT对Hela细胞Hesl基因转录调控机制的研究

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目的:探讨DAPT(γ-分泌酶抑制剂)对Hela细胞Hes1基因转录调控的影响,初步揭示DAPT抑制Hela细胞Hes1基因表达的分子机制。方法:用westernblot,RT-PCR检测不同浓度DAPT处理的Hela细胞Hes1蛋白表达水平,mRNA水平。构建含hes1启动子不同片段的荧光素酶表达载体,转染DAPT处理的Hela细胞,检测各组荧光素酶的变化。用生物信息学查找与其潜在的顺式作用元件相作用的转录因子,用RT-PCR检测不同浓度DAPT作用Hela细胞后转录因子mRNA变化。结果:westernblot,RT-PCR结果显示经不同浓度DAPT处理的Hela细胞Hes1蛋白及mRNA表达下降,并随着DAPT浓度的增加抑制作用更明显。成功构建含有Hes1启动子5’侧翼系列缺失片段的荧光素酶报告载体,分别转染DAPT处理的Hela细胞,测定各组荧光素酶的活性。结果显示,含Hes1启动子pH813与pH528的重组质粒荧光素酶活性比较高,DAPT对各启动子活性均有抑制作用,并随着DAPT浓度的增加抑制作用更明显(p<0.05)。运用生物学信息分析核心启动子区域可能结合的转录因子有SP1、MZF1、SRY、Evil、CdxA等,并且在核心启动子区域有两个SP1的结合位点。运用RT-PCR检测不同浓度DAPT处理的Hela细胞SP1mRNA表达水平下降,具有统计学意义(p<0.05)。结论:在DAPT作用下,Hela细胞Hes1基因启动子上结合的某些转录因子表达变化引起Hes1基因启动子活性下降,从而抑制Hela细胞Hes1基因的表达,降低癌细胞增殖的潜在性,为抗肿瘤治疗提供新的靶标与实验依据。
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