【摘 要】
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目的:我们将利用western blot对滑膜成纤维细胞(RASFs)NF-κB信号通路的P65进行检测。并且利用干预因素HMGB1、IL-1β及HMGB1-IL-1β复合物对4组实验组进行刺激。观察P65表达的多少,解释HMGB1-IL-1β复合物与NF-κB信号通路的内在关系。方法:(1)RASFs分离培养及鉴定:非选择性选取RA患者共计20例,采用组织块培养法、消化酶培养法对所选择的滑膜组织
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目的:我们将利用western blot对滑膜成纤维细胞(RASFs)NF-κB信号通路的P65进行检测。并且利用干预因素HMGB1、IL-1β及HMGB1-IL-1β复合物对4组实验组进行刺激。观察P65表达的多少,解释HMGB1-IL-1β复合物与NF-κB信号通路的内在关系。方法:(1)RASFs分离培养及鉴定:非选择性选取RA患者共计20例,采用组织块培养法、消化酶培养法对所选择的滑膜组织进行培养,并对培养样本经光学显微镜观察,由波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色鉴定,判断其是否为RASFs并探讨RASFs培养方式。(2)HMGB1-IL-1β复合物对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞NF-κB信号通路(P65)的影响:Western blot检测RASFs细胞核中P65的含量变化,从而得到HMGB1-IL-1β对NF-κB信号通路是促进还是抑制的影响。(3)统计学方法:本次研究的所有数据均由23 SPSS0.软件进行统计学处理,且以标准差±均数(s±X)形式表示经随机、正态、独立、方差齐性检验的计量资料,分别采用单因素方差分析法、q-SNK检验法来对比多组间均数和多样本均数,统计意义以P<0.05为标准。结果:1.光学显微镜观察表明,与消化酶法获得的RASFs相比,组织块培养法所培养出的原代RASFs二者形态无显著差异,通过Vimentin免疫组织化学鉴定获得的原代培养RASFs能够满足本项目实验需要。2.HMGB1-IL-1β及其复合物干预RASFs 48h后,根据blot Western表达结果可知,该细胞中含有大量p65,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HMGB1-IL-1β复合物能够引发RASFs病理性改变,在RA病程中发挥重要作用。HMGB1-IL-1β复合物促进RASFs的NF-κB信号通路激活,且该作用强于独立组高迁移率族蛋白1及白细胞介素1β。
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