山东主栽果树AFLP指纹图谱的构建

来源 :莱阳农学院 青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jj13148
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究选用苹果(MaluspumilaMill.)、梨(Pyrus.L)、桃(P.persicaBatch)和枣(ZiziphusjujubeMill.)4种山东主栽果树共53个品种作为试材,应用ALFP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism,扩增片段长度多态性)技术构建了这4个树种的DNA指纹图谱,并应用其DNA指纹图谱对试材进行了分子水平鉴定和遗传关系分析。   采取新鲜叶片作为果树基因组DNA的提取材料,采用改良CTAB法提取果树基因组DNA。其提取液成分为:3%CTAB,1.4mol/LNaCl,20mmol/LEDTA,100mmol/LTris.HCl(pH8.O),2%β-巯基乙醇。粗提后DNA经酚/氯仿/异戊醇抽提两次,除去蛋白质,经RNase除去RNA,最后用氯仿/异戊醇除去多余的RNase,得到了浓度大,基本无降解,蛋白质和RNA去除彻底,纯度高、质量好的果树基因组DNA。   通过对内切酶用量、酶切时间、连接时间、稀释倍数等的研究,建立了适于果树分析的AFLP银染技术体系。在50μL酶切连接体系中,含基因组DNA200-500ng,NEBBuffer25μL,BSA0.25μL,EcoRⅠ(20U/μL)0.25μL,MseⅠ(10U/μL)0.5μL,EcoRⅠ接头(adapter)(5pMol/μL)1.OμL,MseⅠ接头(adapter)(50pMol/μL)1.OμL,加无菌水ddH2O至50μL,37℃过夜;酶切连接产物进行预扩增,预扩产物稀释20倍进行选择性扩增,加入7μL上样缓冲液(Loadingbuffer),95℃变性5min,立即冰浴;在6.0%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分析,银染法检测PCR产物。   从40对引物组合中筛选出8对引物组合对53个供试品种进行了扩增,初步构建了苹果、梨、桃和枣4种果树的AFLP指纹图谱。通过分析指纹图谱中品种的特异带,可以将烟富系的6个品系分成2组:烟富1号和2号为一组,烟富3号至6号为一组;可以将供试的21个梨品种和7个枣品种全部区分开。这体现出了AFLP在品种鉴定上的高效率,如继续筛选引物组合,可以区分开供试所有品种。   根掘构建的DNA指纹图谱,采用NTSYS软件计算简单匹配系数(Sm),进行分析,建立了苹果和桃2种果树品种的聚类分析树状图,分析了这2个树种的遗传多样性,初步揭示了树种内品种间的亲缘关系,为品种鉴定、种质资源保存及育种亲本选配,提供了理论依据。
其他文献
三角板是我们非常熟悉的学习工具,平行线是生活中最常见的基本图形,将平行线与三角形知识结合起来考查的试题在中考中频频出现。现从2018年各地中考试题中摘撷几例,供同学们参考。  一、直角顶点在平行线上  例1 (2018·淮安)如图1,三角板的直角顶点落在矩形纸片的一边上,若∠1=35°,则∠2的度数是( )。  A.35° B.45° C.55° D.65°  【解析】由图可知,三角板的直角顶点落
期刊
以LN11、EP326、日节成12、ZR22和慈溪小黄瓜为试材,采用Griffing方法2,对加工类型黄瓜15个基因型的5个主要品质性状(果实长度、肉径比、果实鲜重、可溶性蛋白质和可溶性总糖含