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阿胶是一味传统中药,在中国具有2000多年食用历史。阿胶一直被公认为治病圣药,曾被李时珍记入本草纲目誉为补血圣药。阿胶主要由黑驴皮熬制而成,它的基本成分为胶原蛋白的降解产物。阿胶止血补血促进造血的功能已被广泛接受。然而,阿胶对细胞,动物模型,人体免疫系统的药理学机制没有被报道过。我们都知道,在正常生理条件下,体内细胞凋亡及细胞再生处于平衡状态,然而当细胞凋亡出现异常时,疾病就会伴随发生。目前无论是细胞凋亡或是氧化应激在临床很多重大疾病的发生发展中扮演着极为重要的角色。例如败血症,它是由细菌等多种病原微生物感染引起的多器官功能性障碍疾病。目前临床上对败血症的治疗主要依赖抗生素及其他辅助治疗措施,而这些手段往往因抗药性和抗生素毒性及疾病复杂性等不能发挥很好的治疗效果。败血症患者的免疫系统易发生氧化应激和细胞凋亡;因此,本课题主要研究阿胶是否可以促进细胞培养物,小鼠败血症模型及人外周血单核细胞中氧化应激的抗性,进而将阿胶用于临床常见病的治疗。首先,我们发现阿胶对体外培养的RAW264.7细胞无毒副作用;在无血清饥饿处理条件下,阿胶能促进体外培养细胞的分裂繁殖能力。其次,在氧化应激压力下,阿胶对RAW264.7细胞具有抗凋亡作用。为证明阿胶保护作用的普遍性,选择其他免疫细胞和非免疫细胞进行实验,我们发现阿胶这种保护作用具有免疫细胞特异性。蛋白水平的检测结果表明阿胶能显著降低Caspase-3和PARP1(Cas3的底物)等凋亡蛋白的表达量。此外,阿胶不仅能降低细胞内ROS的水平同时也能改善线粒体膜功能。在百草枯诱导果蝇氧化应激模型中,我们再次证明了阿胶的直接抗氧化应激作用。在体内为进一步验证阿胶的抗凋亡作用,我们通过腹腔注射LPS建立小鼠败血症模型。通过DNA ladder实验和TUNEL染色我们发现阿胶能显著降低败血症小鼠免疫器官(胸腺和脾脏)细胞凋亡的数量。通过对血清中炎症因子的ELISA检测表明,在败血症早期阿胶能显著提高抗炎性细胞因子IL-10的水平,使败血症小鼠积极抵抗炎症反应进一步降低促炎性细胞因子IL-1β;IL-6;TNF-α;HMGB1的水平,从而提高败血症小鼠的幸存率。最后,由于双氧水刺激会造成人免疫细胞快速死亡,所以采用Etoposide、Staurosporine、LPSplusNigericin进行凋亡的诱导进而检测阿胶对人免疫细胞(THP1cell和PBMCcell)的保护作用。通过Caspase3/7活性检测,ATP检测及凋亡蛋白PARP1的断裂情况检测,我们发现阿胶对人免疫细胞仍然具有抗凋亡的作用效果,且这种保护作用不随凋亡诱导剂的变化而改变。败血症引起的细胞凋亡会通过不同方式影响宿主的免疫功能,例如免疫器官和免疫细胞的凋亡、免疫抑制、细胞因子大量表达等。此外,氧化应激诱导的免疫细胞凋亡在衰老及辐射损伤诱导疾病的发生发展中扮演着重要作用。因此,阿胶作为一种免疫保护剂有望成为能应用于临床的抗凋亡药物,进而治疗多种由细胞凋亡和氧化应激引起的疾病。