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肝癌是严重威胁我国人民健康的肿瘤之一,其发病率和恶性程度高,一旦发现往往已是中晚期,五年生存率仅在2.2-2.3%之间。目前用于肝癌早期诊断的标志物主要为AFP,但仍有较高的漏诊率。因此,迫切需要寻找新的用于肝癌诊断的标志物。SEREX(serological identification of antigensbyre combinant cDNA expression libraries)自1995年问世以来,已被广泛地用于多种不同肿瘤抗原的筛选及鉴定。
本文通过SEREX方法,用6例肝癌病人混合血清对肝癌组织cDNA文库进行三轮筛选,共获得80个阳性克隆。生物信息学分析表明,HCC36阳性克隆即为人类锌指蛋白ZNF216。最新研究表明,ZNF216能够抑制信号通路中NFκB的活性。本文利用原核表达和亲和层析技术获得ZNF216的6*His目的融合蛋白,并建立间接ELISA方法,初步检测正常个体和肝癌病人血清中产生抗ZNF216抗体的情况。ELISA实验结果统计学分析表明,肝癌病人血清中产生的抗ZNF216抗体水平高于正常个体血清。ZNF216基因在人类与小鼠中高度保守,本文合成地高辛标记的ZNF216探针,利用原位杂交技术检测基因ZNF216在成熟小鼠各主要组织细胞中的表达情况。原位杂交结果显示,在成熟小鼠脑、骨骼肌、心脏及睾丸细胞中能检测到很强的基因ZNF216杂交信号;在肾脏细胞中也可检测到杂交信号;在脾脏细胞中仅检测到极少的杂交信号;而在肝脏细胞中未检测到杂交信号,ZNF216基因在成熟小鼠的几种组织内表达,呈现一定的组织特异性。另外,13天小鼠胚胎的原位杂交结果显示,基因ZNF216在胚胎肝脏中有表达。
综上所述,锌指蛋白ZNF216可能与肝癌的发生相关,但有待进一步深入研究证实。原位杂交结果初步提示ZNF216可能参与小鼠部分器官的发育,进一步的研究正在进行中。