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背景:慢性鼻窦炎（chronic rhinosinusitis,CRS）是鼻科常见的慢性炎症性疾病,但是很难进行准确临床分型,主要是因为诊断本身可能代表一个异质综合征,而不是一个独特的临床实体。目前国际广泛采用的临床分型为慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP）与慢性鼻窦炎伴有鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）[1],也可根据病理进行病理分型,其中以嗜酸粒细胞浸润型鼻息肉为研究热点。但至今为止,该疾病的病理生理学尚未明确定义。既往研究学者表明,CRSwNP与CRSsNP的临床两分法最初体现在分子水平上,CRSsNP患者以Th1细胞为主,CRSwNP患者以Th2细胞和嗜酸性粒细胞为主[2],但随后的研究报道了更广泛的免疫谱,表达了一种嗜中性粒细胞类型的炎症,涉及其他T细胞亚群,如Th1和Th17细胞。也有研究发现鼻息肉组织中Th22细胞表达明显增加,可能在局部慢性炎症黏膜免疫中起重要作用[3]。此外,不同的Th细胞类型在同一组织内的同步表达也得到了证实[4]。所以,单从慢性鼻窦炎（CRS）发展为慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）和慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（CRSsNP）这一临床分型可能不能充分反映病理生理多样性[5],而既往Th1和Th2疾病的简单分化不包括CRS患者的分子多样性,Th1/Th2/Th17/Th2多种Th通路中细胞因子作用及机理成为现研究的主流方向。Th9细胞亚群以白细胞介素9（IL-9）的高表达为特征,许多疾病中都有重要地位。研究表明IL-9能诱导CRS粘膜上皮细胞生长、腺体上皮细胞增殖和并在组织浸润后可发挥促炎作用[6]。也有研究指出IL-9在鼻息肉组织中较无鼻息肉高表达,并且在气道高反应发病机制中发挥重要作用,因此,我们推测IL-9与嗜酸性粒细胞支气管哮喘的发生发展存在因果关系。胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）是上皮细胞来源的细胞因子,皮肤、肠道、肺、眼组织和胸腺的上皮细胞和角质形成细胞均可以产生[7]。TSLP通过触发树突状细胞介导Th2炎症反应,增强肥大细胞中IL-1依赖性Th2细胞因子的产生。虽然在鼻息肉（NPs）中发现TSLP mRNA水平升高,但TSLP蛋白在慢性鼻窦炎（CRS）患者中的表达及其功能尚未得到充分探讨[8]。综上所述,目前大部分研究主要集中在IL-9与哮喘的关系及机制和TSLP与肥大细胞的相关性,与慢性鼻窦炎及鼻息肉或嗜酸性粒细胞的研究较少,其中作用机制仍不清楚。目的:本实验旨在观察TSLP及IL-9在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达,分析二者与Th2型炎症因子IL-5及鼻息肉中嗜酸性粒细胞浸润程度的关系,从而探讨IL-9及TSLP在慢性鼻窦炎中发生发展过程中可能的作用机制。实验方法:1、临床资料及实验样本收集:选择合适条件患者入组,详细询问病史、根据病历资料获得主诉、最后诊断、病理号、病理结果等,获取检验检查资料。通过功能性鼻内镜手术获取6例CRSsNP慢性鼻窦炎不伴鼻息肉患者的筛窦粘膜组织,61例为CRSwNP慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者的鼻息肉组织,对照组6例为鼻中隔偏曲患者的鼻中隔或下鼻甲粘膜取出组织浸泡在RNAlater保护液中并在-80摄氏度冰箱保存待分析。2、临床病情评估资料收集:入组患者术前鼻内镜检查Lund-Kennedy得分,术前副鼻窦CT Lund-Mackay得分,鼻分泌物嗜酸性粒细胞比值数据,外周血中嗜酸性粒细胞比值数据。3、组织学分析:根据患者入院行功能性鼻内镜手术后的组织H&E染色,在高倍镜下对组织中嗜酸性粒细胞进行计数及比值计算。4、组织匀浆液制取:切取一定量的组织,加入含有蛋白酶抑制剂,磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液,剪碎后,放入组织研磨仪制取组织匀浆液。离心,取上清液存储于-80℃保存备用。5、组织匀浆液的蛋白质浓度定量:用BCA蛋白定量检测试剂盒对组织匀浆液中的蛋白质浓度进行检测。6、组织匀浆液中细胞因子检测:用Luminex多因子检测试剂盒对组织匀浆液中的IL-5、IL-9、TSLP等细胞因子水平进行检测。7、数据分析:对伴与不伴鼻息肉分组中,嗜酸性粒细胞在组织、鼻分泌物、外周血中比值进行对比分析;分析CRSwNP中IL-5、IL-9、TSLP水平间的相关性;结合术前CT得分,术前内镜得分情况;分析组织嗜酸性粒细胞浸润不同截点时IL-5、IL-9、TSLP的表达情况与CRSwNP临床评分间的相互关系。8、统计分析:采用Graphpad Prism软件和SPSS 18（SPSS,Inc,Chicago,Ill）进行统计分析。数据用柱状图表示,柱状图表示中位数和四分位数范围。未配对比较采用Kruskal-Wallis检验和Mann-Whitney U 2尾检验进行统计分析。当组间比较时,使用Kruskal-Wallis检验来确定组间的显著变异性。然后使用Mann-Whitney U检验进行组间比较。基线变量采用单因素方差分析或Fisher精确检验进行分析。结果:1、CRSwNP组比CRSsNP组、对照组,组织中嗜酸性粒细胞比值显著升高,但鼻分泌物中嗜酸性粒细胞比值无统计学差异,外周血中嗜酸性粒细胞比值无统计学差异。2、IL-5与IL-9及TSLP之间存在显著性相关,IL-9与TSLP存在高度线性相关。3、当组织中嗜酸性粒细胞浸润程度截点为10%,<10%为非嗜酸浸润组,>10%为嗜酸浸润组,非嗜酸浸润组、嗜酸浸润组对比对照组的IL-5、IL-9、TSLP表达升高,术前CT及内镜得分升高。嗜酸浸润组对比非嗜酸浸润组,IL-5表达升高,但IL-9、TSLP未见升高,CT及内镜得分未见升高。4、当组织中嗜酸性粒细胞浸润程度截点为30%,<30%为非嗜酸浸润组,,>30%为嗜酸浸润组,非嗜酸浸润组、嗜酸浸润组对比对照组的IL-5、IL-9、TSLP表达升高,术前CT及内镜得分升高。嗜酸浸润组对比非嗜酸浸润组,IL-5表达升高,但IL-9、TSLP未见升高,CT及内镜得分未见升高。5、当组织中嗜酸性粒细胞浸润程度截点为50%,<50%为非嗜酸浸润组,,>50%为嗜酸浸润组,非嗜酸浸润组、嗜酸浸润组对比对照组的IL-5、IL-9、TSLP表达升高,CT及内镜得分升高。嗜酸浸润组对比非嗜酸浸润组,IL-5、IL-9、TSLP表达升高,CT及内镜得分升高。结论:1、慢性鼻窦炎伴鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞浸润情况与鼻息肉发病存在一定关系。2、IL-5、IL-9、TSLP在鼻息肉组中的表达水平相关性强,可能在慢性鼻窦炎中IL-9、TSLP也如IL-5具有触发及增强嗜酸性粒细胞聚集作用,发挥Th2通路作用,从而加重鼻息肉症状。3、当鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞浸程度较重（≥50%）,IL-9、TSLP才表现显著升高并与CT、内镜得分对应,IL-9、TSLP可能在难治性鼻窦炎中的发病及预后有一定意义。