苯并(a)芘诱导肺腺癌A549细胞上皮—间质转化及其机制研究

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目的观察香烟前致癌物苯并(a)芘(B[a]P)诱导肺腺癌A549细胞上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT),及对A549细胞转移、增生的影响;并初步探讨转录因子Twist1在B[a]P诱导上皮-间质转化机制中的作用。方法应用1μmol/L B[a]P持续处理A549细胞4周。与未处理组和溶剂组相比,观察不同时间点EMT的变化:观察各组的细胞形态;划痕实验、transwell小室检测各组细胞转移能力;激光共聚焦检测细胞E-cadherin和vimentin蛋白的表达;RT-PCR检测twist1、E-cadherin、vimentin和N-cadherin的mRNA转录情况;通过western blot实验测定上述基因蛋白质表达,细胞增生能力应用MTT实验完成。用pGCsilencerTM-twist1-shRNA下调A549 B[a]P-4w细胞中twist1表达后,观察干扰前后A549 B[a]P-4w细胞形态、转移能力改变,及mRNA和蛋白质表达情况。结果数据显示1μmol/L B[a]P诱导A549肺腺癌细胞发生EMT。EMT过程中伴有一定程度的细胞形态改变和下调了上皮细胞标志蛋白E-cadherin的表达,伴随有vimentin和N-cadherin间质细胞标志蛋白表达升高,细胞转移能力增强。B[a]P通过升高转录调节因子Twist1的表达,而诱导A549肺腺癌细胞EMT,应用shRNA抑制Twist1的表达后,多边细胞增加,转移能力下降,E-cadherin表达升高,而vimentin和N-cadherin表达下调,但没有出现完全的逆转。B[a]P能增强A549肺腺癌的增生能力,不受twist1表达情况的影响。结论我们的研究显示B[a]P诱导A549肺腺癌细胞EMT,增强A549细胞转移增生能力;转录调节因子twist1参与B[a]P诱导的EMT的调节,但对细胞增生无影响。
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