兴隆水牛是海南著名的地方水牛品种,具有耐湿热、抗病力强等特性,有较高的经济养殖价值。由于缺乏资源保护意识,现有兴隆水牛品种资源退化,抗病力不断下降,这对其生产性能和产品质量产生了较大影响,造成了巨大经济损失。传染疾病的发生己成为影响水牛养殖产业健康发展的主要因素,而对水牛疾病相关蛋白的研究将有助于提高水牛对疾病的综合抗性,并指导其养殖。Toll样受体(Toll-like receptors, TLR)是天然免疫系统中重要的模式识别受体(Pattern recognition receptors, PRRs),可以识别多种病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns, PAMPs),并参与中风、感染、肿瘤和中枢神经系统等疾病相关的破坏性炎症过程。Toll样受体2(Toll-like receptor2, TLR2)是TLR家族重要成员之一,可以调节或控制先天与获得性免疫,识别广泛的PAMPs。其在结核分枝杆菌和革兰氏阳性菌的识别中发挥重要功效,在内源性配体的识别和自身免疫性疾病的发展中也起着重要作用。髓样分化因子88(Myeloid differentiation primary response protein88, MyD88)是TLR信号通路中重要的接头蛋白,也是信号向下游转导的关键靶分子。最近的研究表明MyD88可能在创伤性脑损伤后的炎症和病变发展中起重要作用。基于以上原因,对TLR2和MyD88的研究将有助于指导TLR参与的重病牲畜和人的临床治疗,对TLR信号通路的调节有可能成为炎性免疫性疾病新的治疗策略。本研究通过RT-PCR技术从海南兴隆水牛中分别扩增出TLR2、MyD88cDNA序列,其开放阅读框分别为2355bp和891bp。对TLR2基因进行了生物信息学分析,并对MyD88进行了原核表达,构建了pET28a-MyyD88表达载体,转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,进行了Ni柱亲和层析纯化及Western blotting鉴定,得到一个带His-Tag的约39kDa的重组融合蛋白。细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle42, Cdc42)是Rho家族蛋白成员,具有GTP酶活性,在肿瘤细胞转化、增殖、生存、浸润和转移等方面起分子开关作用。其异常活动会导致多种疾病如癌症的发生。最近对Cdc42蛋白的研究主要调查其在病理生理机制中的作用,并评估其在相关疾病中的治疗潜力。本实验克隆了Cdc42cDNA序列,序列分析显示其包含1个576bp的开放阅读框。应用荧光定量PCR和Western blotting技术对Cdc42在兴隆水牛心、肝、脾、肺、肾和小肠六种组织中的表达水平进行了检测,结果显示Cdc42在六种组织中均有表达,但其表达水平具有组织特异性,在肺中的表达量最高。本文所得结果为研究兴隆水牛相关疾病的病理生理机制和提供直接的治疗方法奠定了基础。