基于量子点编码微球在流式细胞仪检测白血病患者细胞因子应用的研究

来源 :华东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hzsbf
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多重生物分子高通量检测技术广泛应用于分子筛选和疾病诊断当中,而基于悬浮微阵列的荧光编码聚合物微球是该技术中普遍使用的检测分子。本文先对比了几种制备微球的常规方法的结果,最后采用分散聚合法,制备了微球种子(Seed),再把Seed通过种子聚合扩增粒径的方法,制备了单分散、粒径可控的微球(Polystyrene Microspheres,PS),并在合成过程中加入甲苯致孔剂、羧基功能团使其多孔化、羧基功能化。通过改变组分比例,制备了4种发射波长的量子点(Quantum Dots,QDs),其发射波长范围在475-725 nm之间,并将发射波长为605 nm的QDs掺杂进入微球中,形成量子点微球(QDs@PS)捕获分子,最后成功将其应用于流式检测。首先我们用扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)、动态光散射(Dynamic Light Scattering,DLS)、Zeta电位分析、荧光显微镜和荧光光谱仪对PS和QDs@PS进行了观察。SEM和流式细胞术以及DLS结果表明,PS为球形颗粒,粒径分布均匀,平均粒径为5μm。Zeta电位变化和傅里叶红外光谱(Fourier Transform Infrared,FTIR)吸收谱图表明,微球上成功连接羧基。荧光显微镜图像证明,QDs能够良好的掺杂分布在整个PS球中,并且在球体中发光均匀,荧光也不易猝灭。此外,在荧光光谱仪对QDs@PS光稳定性检测中发现,在生理环境下,其光稳定性保持良好,QDs未有严重的泄漏情况,16天内其荧光强度变化较小。在第16天的荧光显微镜观察下,QDs@PS的发光亮度明亮,与第1天相比亮度基本未发生变化。在与人免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,Ig G)的免疫反应中,将605 nm的QDs@PS作为捕获分子,540 nm的Q Ds作为探针分子,荧光光谱分析结果表明,成功将QDs@PS与Ig G蛋白进行了生物偶联,表明了微球表面羧基与蛋白进行缩合反应的有效性,同时验证了免疫反应的特异性。在进一步的双抗免疫夹心反应中,实现了与白血病高表达抗原白介素6(Interleukin 6,IL-6)共价结合。最后,在流式免疫检测中,将材料与白血病病人的血清样品进行反应,计算QDs的荧光强度,来反映血清中IL-6抗原的含量。综上结果表示,量子点编码微球可以通过双抗夹心反应,在体外检测疾病中高表达的抗原,特别是在血液类疾病的诊断中,利用量子点的发光优势,具有很大前景。
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