论文部分内容阅读
人类防御素是一类天然阳离子抗菌肽，包括α防御素和β防御素。人类α防御素包括6种，分别由中性粒细胞(第1～4种)和小肠潘氏细胞(第5和第6种)产生。人类β防御素(humanβ-defensins，hBDs)也包括6种，即hBD-1～hBD-6。hBD-1～hBD-4由包括角质形成细胞在内的上皮细胞产生，hBD-5和hBD-6则由附睾产生。人类cathelicidinLL-37为另一类重要的天然阳离子抗菌肽，由于其氨基酸序列以两个亮氨酸(Leucine，简称L)起始，共37个氨基酸残基而得名。LL-37在中性粒细胞组成性分泌，在角质形成细胞可被诱导产生。抗菌肽具有广谱抗微生物活性，可杀灭细菌、真菌以及病毒。溶菌酶主要存在于分泌细胞、角质形成细胞和汗液、唾液、泪液、乳汁等体液中，也具有杀灭细菌和真菌的能力。已有报告人类α防御素和LL-37能协同抗金黄色葡萄球菌(金葡菌)和大肠杆菌，也有报告人类正常皮肤的pH值为酸性。而hBD-1、hBD-2、hBD-3、LL-37以及溶菌酶能否在中性及酸性pH条件下协同抗细菌及真菌尚未见报道。
研究目的：研究在酸性和中性pH条件下hBD-1、hBD-2、hBD-3、LL-37以及溶菌酶对金葡菌、大肠杆菌和白念珠菌的协同抗菌作用。
方法：抗菌肽和溶菌酶的抗金葡菌和大肠杆菌敏感性用微量稀释法检测，抗白念珠菌活性采用稍加修改的美国NCCLS(NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards，全国临床实验室标准委员会)M27-A2之微量稀释法检测。细菌与真菌的存活率用AlamarBlue显色法由分光光度计测出。
结果：hBD-1、hBD-2、hBD-3、LL-37以及溶菌酶在中性和酸性pH时的抗金葡菌、大肠杆菌和白念珠菌活性呈剂量依赖性。在酸性pH时，hBD-1、hBD-2、hBD-3和溶菌酶的抗金葡菌和大肠杆菌活性增强或不变；但LL-37的活性减弱。酸性条件下只有LL-37和溶菌酶的抗白念珠菌活性略有增强。当联合使用低于杀菌浓度的hBD-1、hBD-2、hBD-3和LL-37以及溶菌酶时，在中性条件下，一部分组合显示出对金葡菌和大肠杆菌的协同抗菌效果。在酸性条件下，抗金葡菌的协同作用大大加强，这在大多数的组合方式中都能观察到，但协同抗大肠杆菌作用则很弱。联合应用hBD-1、hBD-2、hBD-3、LL-37和溶菌酶对白念珠菌仅部分组合产生相加作用。
结论：抗菌剂hBD-1、hBD-2、hBD-3、LL-37和溶菌酶能协同杀灭金葡菌和大肠杆菌，在酸性条件下对金葡菌的这种作用显著增强。提示在人类正常皮肤pH下，抗菌剂hBD-1、hBD-2、hBD-3、LL-37和溶菌酶可通过协同作用保护机体免受微生物侵袭。