[目的]：　　1.明确miR-1291对预测靶基因ABCC1、TRAF4、MMP24和Bcl-2的靶向作用，为进一步研究低氘水抗肿瘤作用机制提供实验基础;　　2.探讨低氘水调控miR-1291对人肺癌A549细胞株增殖与迁移的影响，并研究其可能的相关机制;　　3.观察低氘水对人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株对顺铂的药物敏感性的影响，并探讨miR-1291在其中可能的作用机制;　　4.分析肺癌组织切片中PTEN蛋白与ATP蛋白的表达与肺癌患者临床统计信息以及预后的关系，为肺癌临床治疗提供实验数据。　　[方法]：　　1.构建过表达miR-1291和Negative Control的人肺癌A549细胞株和人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株，运用qRT-PCR实验对其表达进行验证;分别命名为A549-NC、A549-1291、A549/DDP-NC、A549/DDP-1291;　　2.划痕实验、平皿克隆实验和流式细胞术测细胞周期实验探讨过表达miR-1291对人肺癌A549细胞株增殖与迁移能力的影响;　　3.流式细胞术测细胞周期实验探讨培养基中氘的浓度对人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株细胞周期的影响;　　4.MTT实验、平皿克隆实验以及流式细胞术测细胞周期实验探讨过表达miR-1291对人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株耐药性的影响;　　5.超微量ATP酶检测实验观察培养基中不同浓度的氘和过表达miR-1291对人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株ATP酶的酶活力的影响;　　6.运用双荧光素酶报告系统实验初步验证miR-1291对ABCC1、TRAF4、MMP24和Bcl-2四个预测基因的靶向调控作用;　　7.通过qRT-PCR实验，检测过表达miR-1291的人肺癌A549细胞株TRAF4基因的表达水平和过表达miR-1291的人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株ABCC1基因的表达水平;　　8.Western blot实验检测低氘水对人肺癌A549细胞株TRAF4、PIP2、PIP3、IκKα、p-IκKα/β、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达的影响;　　9.Western blot实验检测过表达miR-1291的人肺癌A549细胞株PIP2、NQO-1、 PTEN、 p-PTEN、 non-p-PTEN、 TRAF4、 PDK-1、p-PDK-1、 PIP3、 IκKα、p-IκKα/β、NF-κB p65、p-NF-κB p65和PCNA蛋白的表达;　　10.Western blot实验检测ABCC1、MDR和ATP蛋白在低氘水处理人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株和过表达miR-1291的人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株中的表达水平;　　11.免疫组织化学探讨33例非癌组织与100例肺癌患者组织切片中PTEN蛋白和ATP蛋白表达水平与肺癌患者临床信息的相关性，和患者生存时间的关系。　　[结果]：　　第一部分:低氘水调控miR-1291对人肺癌A549细胞株的增殖抑制　　1.划痕实验结果显示，过表达miR-1291的人肺癌A549细胞株，其细胞迁移能力受到抑制;　　2.平皿克隆实验和流式细胞术测细胞周期实验结果显示，过表达miR-1291的人肺癌A549细胞株，肿瘤细胞的增殖受到抑制;　　3.双荧光素酶报告系统实验显示，TRAF4和ABCC1可能是miR-1291的靶基因，受到miR-1291的特异性调控;　　4.qRT-PCR实验结果显示，过表达miR-1291的人肺癌A549细胞株，其TRAF4基因表达下调;　　5.Western blot实验结果显示，低氘水培养基处理A549细胞后，TRAF4、PIP3、IκKα、p-IκKκα/β、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白表达下调，PIP2蛋白表达上调;稳定表达miR-1291的A549/DDP细胞，其PIP2、NQO-1、PTEN、p-PTEN和non-p-PTEN蛋白的表达上调，TRAF4、PDK-1、p-PDK-1、PIP3、IκKα、p-Iκ Kα/β、NF-κB p65、p-NF-κB p65和PCNA蛋白的表达下调;　　6.通过对33例非癌组织与100例肺癌患者组织切片的免疫组化实验分析，与非癌组织相比，PTEN蛋白在肺癌组织中是低表达的，且PTEN蛋白的表达水平与肺癌患者的T分期、N分期、TNM分期和预后相关。　　第二部分:低氘水调控miR-1291对人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株多药耐药性的影响　　1.流式细胞术测细胞周期实验结果显示，培养基中低浓度的氘能够抑制A549/DDP细胞的细胞周期，表现为G1期细胞数增多，S期细胞数减少;　　2.MTT实验和平皿克隆实验显示，过表达miR-1291能够增加A549/DDP细胞对化疗药物顺铂的药物敏感性;　　3.流式细胞术测细胞周期实验结果显示，过表达miR-1291的人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株的细胞周期受到抑制，表现为G1期细胞数增多，S期细胞数减少;　　4.超微量ATP酶实验结果显示，随着培养基中氘浓度的下降，人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株的Na+ K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和T-ATP酶的酶活力也下降;过表达miR-1291的人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株的ATP酶的活力也受到了抑制;　　5.qRT-PCR实验结果显示，过表达miR-1291的人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株，其ABCC1基因表达下调;　　6.Western blot结果显示，低氘水培养基处理A549/DDP细胞与过表达miR-1291的A549/DDP细胞，细胞的ABCC1、MDR和ATP蛋白的表达下调;　　7.通过对33例非癌组织与100例肺癌患者组织切片的免疫组化实验分析，与非癌组织相比，ATP蛋白在肺癌组织中是高表达的，且ATP蛋白的表达水平与肺癌患者的T分期、N分期、TNM分期和预后相关。　　[结论]：　　1.miR-1291靶向作用于ABCC1和TRAF4，特异性的调控靶基因的表达;　　2.低氘水调控人肺癌A549细胞株miR-1291的表达，上调PIP2、NQO-1、PTEN、p-PTEN和non-p-PTEN蛋白的表达，下调了TRAF4、PDK-1、p-PDK-1、PIP3、IκKα、p-IκKα/β、NF-κB p65、p-NF-κB p65和PCNA蛋白的表达，抑制人肺癌A549细胞株的增殖与迁移;　　3.低氘水调控人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株miR-1291的表达，下调ABCC1、MDR和ATP蛋白的表达，逆转人肺癌耐顺铂A549/DDP细胞株的多药耐药性;　　4.PTEN蛋白在肺癌患者的组织中是低表达的，与肺癌的T分期、N分期和TNM分期相关，并且与肺癌的预后相关;ATP蛋白在肺癌患者的组织中是高表达的，与肺癌的T分期、N分期和TNM分期相关，并且与肺癌的预后相关。