论文部分内容阅读
第一部分PKA介导ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制研究目的：研究表明,EphB受体以及它的配体eprinB参与脊髓水平伤害性信息的处理过程。本实验中,我们探讨了蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)是否作为其下游的效应分子,进而介导ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制。研究方法：我们使用雄性C57BL/6小鼠来检测PKA催化亚基(PKAca)的表达、磷酸化的cAMP反应元件结合蛋白(p-cAMP-response element binding protein, p-CREB)、热痛觉过敏以及机械痛觉异常。PKA的一个抑制剂H89则被用来探讨PKA在ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息调制中的作用。研究结果：鞘内注射ephrinB2-Fc能够引起小鼠热痛觉过敏以及机械痛觉异常,并且伴随着脊髓PKAca以及p-CREB的表达增加。预先给予PKA的抑制剂H89阻断了由于鞘内注射ephrinB2-Fc引起的脊髓CREB蛋白的激活。抑制脊髓的PKA信号能够阻断和逆转小鼠由于鞘内注射ephrinB2-Fc引起的疼痛行为。进一步的研究发现,通过鞘内注射EphB2-Fc来阻断EphB受体能够减轻formalin引起的炎性疼痛、坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury, CCI)引起的神经病理性疼痛、以及胫骨骨腔种植肿瘤细胞引(tibia bone cavity tumor cell implantation, TCI)起的骨癌痛的疼痛行为。并且这种疼痛减轻的同时,伴随着脊髓PKAca以及p-CREB的表达下降。研究结论：这些结果证明了PKA参与ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制的过程。这一结果可能对于探讨ephrinB-EphB信号在生理和病理性疼痛中的作用机制具有重要的提示作用。第二部分EphrinB-EphB信号通过PKCγ调控脊髓疼痛信息处理过程研究目的：脊髓水平ephrinB-EphB信号参与调控疼痛信息的处理过程。本研究深入探讨了蛋白激酶C-γ亚型(PKCγ)是否作为一个下游的效应分子,进而介导ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制。研究方法：我们分别使用辐射热源以及von-Frey细丝来检测小鼠的热痛觉过敏以及机械痛觉异常情况。免疫印迹(western blot)分析用来检测PKCγ的表达。靶向的PKCγ小干扰RNA (small interference RNA, siRNA)用来探讨PKCγ是否参与ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制。研究结果：鞘内注射EphB受体的激动剂ephrinB2-Fc能够引起小鼠热痛觉过敏以及机械痛觉异常,同时还使脊髓PKCγ的活化增加。基因沉默脊髓水平的PKCγ阻断了由鞘内注射ephrinB2-Fc引起的该疼痛行为。进一步的研究发现,鞘内注射EphB受体的阻断剂EphB2-Fc,能够抑制formalin引起的炎性疼痛、CCI引起的神经病理性疼痛、以及TCI引起的骨癌痛的疼痛行为。除此之外,这些疼痛减轻的同时还伴随着脊髓PKCγ的表达下降。最后,鞘内注射MK801,一种N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid, NMD A)受体的阻滞剂,能够显著的减轻ephrinB2-Fc引起的疼痛行为以及脊髓PKCγ的激活。研究结论：总的来说,这些结果证明了PKCγ在ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制中发挥重要作用。第三部分PLCγ1参与EphrinB-EphB信号相关的脊髓疼痛信息的处理研究目的：脊髓水平的ephrinB-EphB信号参与调控疼痛信息的处理过程。本研究探讨了磷脂酶C-γ1亚型(PLCγ1)是否作为一个下游的效应分子参与ephrinB-EphB信号相关的脊髓疼痛信息的处理。研究方法：辐射热源以及von-Frey细丝被分别用来检测小鼠的热痛觉过敏以及机械痛觉异常情况。Western blot用来检测PLCγ1的表达。靶向的PLCγ1小干扰RNA则用来检测PLCγ1是否参与ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的处理。研究结果：鞘内注射ephrinB2-Fc (EphB受体的激动剂)能够引起小鼠热痛觉过敏以及机械痛觉异常,同时还使脊髓PLCγ1的活化程度增加。基因沉默脊髓水平的PLCγ1阻断了由鞘内注射ephrinB2-Fc引起的小鼠疼痛行为。我们进一步发现,鞘内注射EphB2-Fc (EphB受体的阻断剂)能够抑制formalin引起的炎性疼痛以及CCI引起的神经病理性疼痛行为,同时,还伴随着脊髓PLCγ1的活化下降。研究结论：总的来说,这些结果证明了PLCγ1参与了ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的处理过程。第四部分COX-2参与EphrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调控研究目的：EphB受体以及它的配体eprinB参与脊髓水平伤害性信息的处理过程。本研究中,我们探讨了环氧酶2 (cyclo-oxygen-ase-2, COX-2)是否作为其下游的效应分子,进而介导了ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制。研究方法：辐射热源以及von Frey细丝被分别用来检测小鼠的热痛觉过敏以及机械痛觉异常情况。实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)用来检测脊髓COX-2的表达。脊髓COX-2以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinas, ERK)蛋白的表达情况则由western blot来检测。研究结果：鞘内注射ephrinB2-Fc能够引起小鼠热痛觉过敏以及机械痛觉异常,并且伴随着脊髓COX-2的mRNA以及蛋白的表达增加。抑制脊髓的COX-2信号能够阻断和逆转了由鞘内注射ephrinB2-Fc引起的小鼠疼痛行为。通过鞘内注射EphB2-Fc阻断EphB受体,能够减轻完全弗氏佐剂(CFA)引起的炎性疼痛行为,同时脊髓COX-2的mRNA以及蛋白也相应的表达下降。进一步的研究发现,给予U0126,一种有丝分裂原活化蛋白／胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein/extracellular signal-regulated kinas, MEK)的抑制剂,能够抑制由鞘内注射ephrinB1-Fc引起的脊髓ERK的激活以及COX-2 mRNA和蛋白的表达增加。研究结论：这些结果证明COX-2参与了ephrinB-EphB信号相关的脊髓伤害性信息的调制。