流动式核黄素光化学法病毒灭活血浆制备体系的建立与效果评价

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目的  基于核黄素联合紫外线灭活血浆病毒的方法原理,研制出一种流动式的血浆病毒灭活设备,实现流动式批量处理血浆的目的,评估经该设备处理后,血浆中血浆病毒灭活效果和血浆蛋白的保持率。  方法  1.根据大量关于核黄素光化学法的文献,以及对Mirasol系统的研究,建立核黄素光化学法灭活病毒所需的基本参数。自主设计流动式病毒灭活设备的图纸,挑选最佳方案,制作实验室小试成品。  2.对制作成型的设备进行主要参数的测定和测量,包括紫外灯的测定和样品管的测量,保证设备的再塑性。  3.在血浆中加入一定量的病毒液模拟病毒污染血浆的状况(血浆:病毒液为10∶1),再加入终浓度为60μmol/L的核黄素溶液。在经设备不同时间的处理后,测定处理前和不同时间处理后血浆中病毒的毒力(TCID50),计算得出不同处理时间的病毒灭活效果。  4.选中四种血浆中的主要功能蛋白,在经设备不同时间的处理后,测定处理前和不同时间处理后蛋白的活性,计算得出不同处理时间的蛋白保持率。  结果  1.选定了紫外灯夹心石英管方案。  2.制作成型的设备,紫外光谱为313nm联合365nm宽带波峰,照射强度为6mW/cm2。石英流动管的透光率为95%,内径5mm,壁厚1mm。  3.选定了5min、10min、15min、20min四种处理时间。在5min处理后,病毒灭活效果最低,随着处理时间的延长,病毒灭活效果也在增强。当时间达到10min时,VSV、PRV、EMCV、PPV的平均灭活滴度大于4 logs;当处理时间达到20 min后,指示病毒的灭活滴度都达到5.5 logs以上。  4.经不同时间的设备处理后,不同蛋白会对设备的处理产生不同的敏感度:在处理10min时,保持率最高的为AT-Ⅲ的90%,保持率最低为纤维蛋白原的60%;当处理时间为20min时,蛋白损失严重,最低的保持率是纤维蛋白原仅仅为28%。  结论  1.在不同的处理时间,病毒灭活效果和蛋白保持率也各不相同。  2.处理时间越长,病毒的灭活效果越好,然而蛋白的保持率越低,而且每种蛋白对处理的敏感度也不尽相同。  3.为了平衡病毒的灭活效果和蛋白的保持率,制定最佳的处理时间为10min左右。
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