肠球菌(Enterococcus)能引起多种疾病的发生,临床主要以粪肠球菌和屎肠球菌为主。粪肠球菌拥有众多的毒力因子,目前已确定的有十余种。近年来,新疆北疆部分地区发生以神经症状和败血症为主要特征的羔羊脑炎,引起大批羔羊死亡,从病死羔羊的体内分离鉴定到了粪肠球菌,但目前对这些分离株还缺乏系统的研究。因此本研究以致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05为研究对象,在对其基因组精细图测定基础上,采用信息学方法分析致羔羊脑炎粪肠球菌新的可能的毒力因子基因,并对这些可能的基因进行初步研究,为进一步确定该基因在羔羊脑炎发生过程中的作用的研究奠定基础。结果如下:　　1.提取致羔羊脑炎XJ05全基因组DNA,进行细菌基因组精细图的测定,结果显示XJ05株基因组全长2558778 bp,基因总数为2787个,有75个特有基因序列,与Genbank公布的来自人的5株肠球菌基因组全序列进行比对分析,结果显示致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05与来自人的肠球菌同源性极高,系统进化处以一个分支当中。　　2.应用信息学技术分析羔羊脑炎粪肠球菌XJ05基因组精细图,推测新的可能的毒力因子基因,根据这些基因序列设计引物PCR扩增致羔羊脑炎粪肠球菌其他分离株,对扩增产物测序并与来自于Genbank中不同种属细菌的相应序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析。结果显示,XJ05携带有SigA、GlnA、Pfs、和LuxS等4个基因。而其他分离株XJ01、XJ03、XJ08、XJ11也扩增到了上述4个基因;粪肠球菌XJ05、XJ01、XJ08、XJ11、屎肠球菌TX2466、大肠杆菌、沙门氏菌的、溶藻弧菌、流感嗜血杆菌kr494、肠球菌V583、枯草芽孢杆菌的LuxS核苷酸同源性在48.9％以上,氨基酸同源性在66.63%以上;粪肠球菌XJ05、XJ01、XJ08、XJ11、屎粪肠球菌TX2466、肺炎链球菌、枯草芽孢杆菌、炭疽杆菌、猪链球菌P1/7的GlnA核苷酸同源性在66%,氨基酸同源性在78.43%以上;粪肠球菌XJ05、XJ01、XJ08、XJ11、屎肠球菌TX2466、肺炎链球菌、溶藻弧菌的Pfs核苷酸同源性在31.2%以上,氨基酸同源性在86.43%以上;粪肠球菌XJ05、XJ01、XJ08、XJ11、屎肠球菌TX2466、枯草芽孢杆菌、炭疽杆菌的SigA核苷酸同源性在65.5%以上,氨基酸同源性在91.46%以上。　　3.将致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05的GlnA、SigA、Pfs和LuxS全基因克隆至原核表达载体pET-28a(+),将该重组质粒转化入大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳分析及Western blot检测。结果显示,重组质粒经诱导后表达出分子量分别为43 kDa、52 kDa、28 kDa和20 kDa的融合蛋白,Western blot检测均显示特异性条带,表明表达出的重组蛋白与粪肠球菌的多克隆血清具有良好的反应原性。