糖尿病是危害人类健康的重大疾病之一,而传统的药物及胰岛素替代疗法却不能从根本上医治该病。近年来,随着免疫抑制剂的改进及细胞移植技术的不断成熟,移植胰岛细胞已成为治愈Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的有效途径。但是,由于每个临床胰岛移植受体通常需要2～4 个新鲜尸体胰腺,胰岛供体短缺的矛盾亦更为突出,制约了利用胰岛细胞治疗糖尿病技术的应用。胰腺干细胞(Pancreatic stem cells)是一类存在于胎儿和成年胰腺组织中的成体干细胞,能自我更新,具有多分化潜能,其特点是在自然分化过程中首先分化为胰腺组织的各种细胞。体外分离、克隆人类胰腺干细胞作为种子细胞,并定向诱导其分化为功能性胰岛细胞移植治疗糖尿病,是解决胰岛供体短缺的有效途径。目前,在世界范围内,分离克隆胰腺干细胞并将其定向诱导分化为功能性胰岛细胞移植治疗糖尿病的研究已成为细胞组织工程研究的又一热点。但是,由于胰腺干细胞的存在部位、标记物等还没有完全确定,世界范围内还没有建立公认的胰腺干细胞系。本研究以人流产胎儿胰腺组织为材料,对胰腺干细胞培养体系的建立,胰腺干细胞的形态和表达特征,胰腺干细胞的分化特性及胰腺干细胞体外诱导胰岛移植治疗大鼠糖尿病等方面进行了较为系统的研究,主要内容包括: 1 人胎儿胰腺干细胞培养体系的建立本研究建立1 例人胎儿胰腺干细胞系。以人胎儿胰腺组织为材料,采用0.1%Ⅳ型胶原酶消化分离人胎儿胰腺组织,获得胰腺单个细胞和细胞团。以低糖DMEM+10% NBS+0.08mg/mL 青霉素+0.1mg/mL 链霉素为基础培养液贴壁培养,获得原代上皮样人胎儿胰腺干细胞及少量成纤维细胞。0.25%胰酶+0.04%EDTA 消化传代,并在传代中逐渐消除成纤维样细胞及其它杂细胞,获得纯化的上皮样人胎儿胰腺干细胞。在基础培养液中添加10ng/mL EGF,扩增纯化人胎儿胰腺干细胞。继续消化传代,建立1 例人胎儿胰腺干细胞系,传50 代。人胎儿胰腺干细胞克隆性生长。当培养皿中细胞数较少时,可见多角形的上皮样胰腺干细胞呈典型的单克隆方式生长;干细胞生长至70%融合时,呈铺路石样。接种培养1～4 天,干细胞生长缓慢,5～6 天,进入倍增期。从干细胞生长曲线和1 年以上细胞扩增情况看,该人胎儿胰腺干细胞有无限增殖的趋势。不同浓度血清、EGF 和IGF-Ⅱ对人胎儿胰腺干细胞增殖有不同的影响。以低糖DMEM 为基础培养液,添加10%NBS,能促进人胎儿胰腺干细胞增殖;在低糖DMEM+10%NBS 的基础上,再添加15ng/mL EGF 或10ng/mL IGF-Ⅱ,均更有助于人胎