【摘 要】
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转基因动物的制作方法有五大类,十几种方案,但是长久以来一直不甚理想,目前仍然以显微注射法为主。由于显微注射法劳动强度大、效率低、周期长、耗费多,科学界一直在寻找替代方案。精子载体法就是以精子为载体,利用精子与卵子结合的过程将外源基因带入受精卵中形成转基因动物的方法,由于方法学上的简捷、便利、又适合几乎所有物种,从1989年Lavitrano用该法建立转基因小鼠以来,备受关注。经过十几年的发展,理论
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转基因动物的制作方法有五大类,十几种方案,但是长久以来一直不甚理想,目前仍然以显微注射法为主。由于显微注射法劳动强度大、效率低、周期长、耗费多,科学界一直在寻找替代方案。精子载体法就是以精子为载体,利用精子与卵子结合的过程将外源基因带入受精卵中形成转基因动物的方法,由于方法学上的简捷、便利、又适合几乎所有物种,从1989年Lavitrano用该法建立转基因小鼠以来,备受关注。经过十几年的发展,理论上已经逐渐阐明了精子载体法建立转基因动物的原因和特点,实践上方案有近十种之多。但是除了1999年Perry使用的胞浆内单精子注射的方法,其余方案稳定性、可重复性及转基因动物的形成效率依然不甚理想。我们总结了精子载体法发展的规律,指出核内转染是精子载体法发展的方向。围绕这一方向,我们在缺少同行工作借鉴的情况下,自己探索小鼠精子的核内转染技术。我们的实验设计主要建立在目前针对原代细胞和难转染细胞最常用的两种方法上,一种是方波分组电穿孔技术;一种是阳离子多聚物聚乙烯亚胺（Polyethylenimine,PEI）转染技术。通过三个串联的实验:（1） 小鼠精子的电穿孔液的研究,（2） 小鼠精子电穿孔条件的研究;（3） 阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染的研究;我们实现了小鼠精子的核内转染,解决了精子载体法建立转基因动物的关键问题,为以后进行大动物精子载体法的研究提供一个新的模式。 各部分实验摘要介绍如下:
其他文献
骨肉瘤好发于处于骨生长阶段时期的儿童及青少年,由于其高度恶性及高致残率,一旦发现多建议患者手术治疗,但目前临床的上的常规的治疗方案仍为手术切除及放化疗,但手术存在切除不彻底或切除范围过大等缺点。化疗则是针对全身的治疗,缺乏对肿瘤细胞的“针对性”,易引起全身毒性及肿瘤细胞的耐药性。基于纳米材料的光热治疗新型肿瘤微创治疗技术应运而生,即利用合成的纳米材料将近红外激光（NIR）的光能转化成热能,从而使肿
研究背景与目的肺癌约占全部恶性肿瘤死亡率的20%,是目前全球癌症死亡的主要原因,其中超过80%的是非小细胞肺癌（NSCLC）。世界卫生组织（WHO）公布的资料显示：肺癌无论是发病率（120万/年）还是死亡率（110万/年）均居全球癌症首位,并且其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。根据我国肿瘤防治办公室公布的资料：从上世纪70年代至今,我国肺癌死亡率上升了近5倍。大量的研究调查显示：吸烟与肺癌的发病密切
研究背景在全球范围内,急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）的发病率呈现不断增长趋势,每年约有200万人死于AKI。中国临床研究数据显示,在普通住院患者中AKI的发病率为3.19%,而在ICU其发病率更高达30%。AKI与患者病死率以及慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）的发生发展密切相关,给个人、社会经济和公共卫生带来了巨大的负担。因此,如何防
研究背景与目的：急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）是一类以髓系造血干/祖细胞异常克隆增殖、分化障碍及凋亡受阻为特点的血液系统恶性肿瘤,在细胞遗传学和分子生物学方面具有高度异质性。现代细胞遗传学技术可以检测出大约30%的AML患者伴有重现性遗传学异常,其中t（8;21）（q22;q22）染色体易位是AML患者中常见的一种重现性染色体异常,该易位使21号染色体上的
背景:鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）是一种原发于鼻咽部黏膜的上皮组织性恶性肿瘤,发病人群主要为东南亚和非洲,欧洲、美洲、大洋洲和拉丁美洲人较少。中国是世界各大洲鼻咽癌发病率最高的地区之一。鼻咽癌对放射治疗大多中度敏感,放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法。基于国家综合癌症网络（NCCN）指南（版本1.2018）,与单独放疗相比,同步化疗/放疗（每周使用顺铂）可提高生存
研究背景:目前己经发现了很多与肺癌发生相关的危险因素如肺气肿,但很少研究在住院慢性阻塞性肺疾病患者中探索与肺癌相关的临床因素。目的:探讨医院慢阻肺患者肺癌的患病率、组织学类型和与肺癌相关的临床因素。方法:本研究是一项以医院为基础的回顾性横断面研究,纳入2013年07月至2020年07月期间就诊于南方医科大学珠江医院的慢阻肺患者。通过医院病历系统、检验检查结果系统收集患者性别、年龄、吸烟史、出院诊断
背景与目的β-地中海贫血是世界上最常见的单基因遗传病之一。其分子基础是人β-珠蛋白基因（HBB）发生突变所致。到目前为止,在世界上不同种族中已发现200余种β-珠蛋白基因突变。其中,绝大部分是单个碱基替代或者是几个碱基的插入或缺失,仅有少数一部分突变是β-珠蛋白基因的部分或者全部缺失。在中国南方,尤其是在广东省和广西省,β-地中海贫血突变具有很高的人群携带率,β-珠蛋白基因突变类型有将近50种,其
随着人类社会的飞速发展,人类某些中枢神经退行性病变[如帕金森病（Parkinson’s disease, PD）,阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）等]和中枢神经系统（central nerve system, CNS）损伤[如脑外伤（Traumatic Brain Injury, TBI）,脊髓损伤（Spinal Cord Injury, SCI）)]的发病率也不断增
哺乳动物的乳腺是一个很特殊的器官，雌性动物的乳腺可以在重复的怀孕和生产的多次循环中再生、退化，是动物出生后唯一可以多次重复再生的器官。早在1959年，DeOme等人研究证实，乳腺组织块移植到去除乳腺腺上皮的小鼠乳腺脂肪垫中可以再生小鼠乳腺。1967年Horishino等人进行的系列移植研究表明，乳腺上皮细胞具有自我复制的能力，且可以维持到第七次移植。1998年Kordon等人通过对啮齿类动物乳腺的
根据已报道的鸡淋巴细胞趋化因子（ChLptn）的cDNA序列中的开放阅读框架序列设计特异性引物,以科宝鸡的脾脏脾淋巴细胞的总RNA为模板进行RT-PCR。将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收,与克隆载体pGEM-T easy连接后,并转化E. coli DH 5α,在含氨苄青霉素的LB平板上选择培养后,挑取白色菌落于LB液体培养基中振荡培养。用此培养物作模板,进行PCR鉴定。将PCR鉴定为阳性的转化