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第一部分LncRNA RP11-6O2.4在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况及与患者临床病理特征之间的关系目的:(1)探讨lncRNA RP11-6O2.4在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况。(2)探讨RP11-6O2.4在胃癌组织中的表达水平与患者相关临床病理特征的关系。方法:(1)通过lncRNA microarray检测胃癌组织与对应癌旁组织中表达存在差异的lncRNA,筛查表达差异大于10倍的lncRNA,最终确定lncRNA RP11-6O2.4作为本实验的目的lncRNA。(2)通过荧光定量PCR进一步验证100例胃癌及癌旁组织中RP11-6O2.4的表达水平变化。(3)通过荧光定量PCR验证胃癌细胞系BGC-823、MGC-803、SGC-7901、AGS及正常胃黏膜上皮细胞GES-1中RP11-6O2.4的表达水平变化。(4)收集100例患者的临床病理相关资料,研究分析lncRNA RP11-6O2.4与患者临床病理特征之间的关系。结果:(1)lncRNA RP11-6O2.4在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(p<0.05)(2)lncRNA RP11-6O2.4在多个胃癌细胞系中的表达低于正常胃黏膜上皮细胞(p<0.05)。(3)lncRNA RP11-6O2.4的表达水平与患者的年龄、肿瘤体积的大小、浸润深度(T分期)、ASA分级有关(p<0.05)(4)利用ROC曲线评价lncRNA RP11-6O2.4表达水平对胃癌的诊断价值的结果中显示AUC=0.6817,有一定的临床诊断价值。结论:lncRNA RP11-6O2.4在胃癌组织和胃癌细胞系中表达均明显降低,其降低与患者更高的年龄,更大的肿瘤体积、更深的浸润程度、更高的ASA分级有关,且RP11-6O2.4的表达水平亦具有一定的临床诊断价值。第二部分LncRNA RP11-6O2.4参与胃癌细胞生物学行为调控的机制研究目的:探讨RP11-6O2.4是否参与胃癌生物学行为调控,及其可能的分子机制方法:(1)在RP11-6O2.4表达降低的标本中(癌组织相对于癌旁组织)通过PCR和Western Blot进一步验证在胃癌中部分较经典的信号通路的表达变化,推测其是否参与了胃癌细胞生物学行为的调控。结果发现ASK1-p38-cyclin D1信号通路呈明显激活状态。(2)在体外实验中,我们通过反向推理使用p38抑制剂下调ASK1-p38-cyclin D1信号通路,观察不同胃癌细胞系中lncRNA RP11-6O2.4的表达是否发生相应变化。(3)通过流式细胞术检测经p38抑制剂处理后胃癌细胞增殖和凋亡的变化。结果:(1)在RP11-6O2.4表达降低的组织中ASK1-p38-cyclin D1信号通路表达明显上调(p<0.05),呈显著的激活状态。(2)在胃癌细胞系MGC-803、BGC-823、SGC-7901、AGS中用p38特异性抑制剂SB203580对细胞进行处理后,结果显示lncRNA RP11-6O2.4的表达水平均明显升高(p<0.05)间接提示lncRNA RP11-6O2.4经由ASK1-p38-cyclin D1信号通路参与了胃癌细胞增殖活性调控。(3)在RP11-6O2.4变化最明显的AGS细胞中,我们进一步检测了ASK1-p38-cyclin D1信号通路中几个关键蛋白的表达水平变化,ASK1表达明显上调(p<0.05)、cyclin D1明显下调(p<0.05),且流式细胞术检测结果显示G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,提示细胞增殖活性等到了明显的抑制。结论:在lncRNA RP11-6O2.4表达降低的组织标本中,ASK1-p38-cyclin D1信号通路是明显激活的,p38显著上调,进一步通过体外实验对胃癌细胞系中p38信号分子给予特异性抑制后,可以显著地引起RP11-6O2.4的明显上调,且细胞的增殖活性得到了明显地抑制。结合RP11-6O2.4的临床分析结果,我们推测RP11-6O2.4可能经由ASK1-p38-cyclin D1信号通路参与了胃癌细胞增殖活性的调控。