论文部分内容阅读
建立以章丘大葱种子为外植体的组培体系，并对继代培养过程中玻璃苗产生的影响因素、试管苗的酯酶同工酶和可溶性蛋白质、组培过程中的染色体变异进行了研究,结果如下：1．以大葱种子为外植体，在MS+2,4-D2.5 mg.L-1+BA0.5 mg.L-1的培养基上,愈伤组织的诱导率为86.95％；由继代3次的愈伤组织诱导分化芽点，诱导分化的最佳培养基为MS+BA2.0 mg.L-1，诱导率为63.9％；根诱导的最佳培养基为MS培养基，诱导率为94.19％；移栽成活率达83.3％以上。该组织培养体系大大提高了大葱组织培养的工作效率。2．从植物激素、蔗糖、琼脂浓度三个方面对大葱组培过程中玻璃化苗产生的影响进行了研究发现，随着细胞分裂素BA浓度增加，玻璃化现象越严重，BA浓度以2.0 mg.L-1为适宜。在一定范围内，蔗糖浓度和琼脂浓度与玻璃化苗数呈明显负相关，相关系数分别为r＝－0.962和r＝－0.990，蔗糖浓度以3％、琼脂浓度以1.2％最佳。在试管苗诱导和继代过程中，增加光照强度也是降低试管苗玻璃化的一种有效手段。3．大葱组培过程中正常苗和玻璃苗的酯酶电泳分析表明，玻璃苗少了Rf0.0852、Rf0.457两条带，多了活性较高的Rf0.229带，控制酯酶的基因可能与试管苗玻璃化的性状表达有密切关系。从正常苗和玻璃苗的可溶性蛋白质电泳图谱可以看出，玻璃苗除具有正常苗的大部分原带型外，同时出现了较高分子量的4条带，这4条带可能是玻璃苗对不平衡的生长因子反应时特异表达的蛋白质；其它谱带无明显变化，这些可能是植物在正常苗和玻璃苗两种生长发育状态下都需要表达的蛋白质，编码它们的结构基因在两种生命状态时都始终处于活跃的表达状态。4． 对在MS＋2,4-D2.0 mg.L-1+BA0.5 mg.L-1上诱导出的愈伤组织及其再生植株的细胞学观察表明,愈伤组织的染色体变异率随继代次数的增加而提高，<WP=6>在愈伤组织中，变异细胞大多以亚二倍体为主；而由继代10次后分化的再生植株中，四倍体的变异细胞占多数。同时对继代1次、10次的愈伤组织及其再生植株的叶片四个DNA样品进行RAPD分析，50个随机引物中有一个引物（S26），在继代10次的愈伤组织、及其诱导分化的植株的叶片中扩增出一个大小为1200bp左右的稳定多态性片段。结果说明继代过程可导致DNA分子碱基的变化，而DNA分子碱基的变化可能是染色体变异的一个重要原因。