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心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)是由禽4型腺病毒(Serotype 4 Fowl Adenovirus,FAdV-4)引起的病毒性传染病,由于首次爆发于巴基斯坦的安卡拉地区,因此也被称为安卡拉病毒。FAdV-4是一种无囊膜,双链DNA病毒,病毒粒子在70-90nm,属于腺病毒科,禽腺病毒属,禽腺病毒C种。FAdV-4主要感染3-5周龄的肉鸡、蛋鸡,临床症状主要表现为黄色或淡黄色的心包积液,而且大多数情况伴随有肝脏肿大。2015年7月以来,FAdV-4在中国多个地区中小型肉鸡场、蛋鸡场屡屡爆发,给中国的家禽养殖业带来巨大损失。由于缺乏对中国流行的FAd V-4毒株的分子进化特征和致病性特征的了解,目前暂无有效的防控措施。本研究从河南爆发该病的12个地级市采样,并进行病毒的分离鉴定和分子流行病学调查,也对致病情况进行了初步研究,旨在为该病的防控提供新线索。本研究从河南境内的安阳、鹤壁、濮阳、新乡、焦作、郑州、开封、商丘、许昌、周口、平顶山、漯河采样,通过鸡胚绒毛尿囊膜途径分离病毒,PCR和测序的方法鉴定。最终分离到了地域来源不同的12个毒株,并鸡肝原代细胞(CEL)上稳定传代,为FAdV-4的进一步研究奠定基础。本研究基于Hexon基因,对文分离的12个毒株和24个参考毒株构建进化树,结果表明:本次分离毒株属于禽4型腺病毒毒株,本次中国爆发的主要毒株与之前流行的毒株在遗传关系上较远,与印度的两个毒株PJ-06和PK-01亲缘关系较近。同时进行核酸和氨基酸对比分析,结果表明:与同一簇中的ON1、KR5、MX-SHP95、PK-01、PJ-06毒株相比较,本次毒株的Hexon基因的核苷酸差异率分别为1.31%、1.10%、1.42%、2.77%、2.84%。结合进化树和氨基酸分析,表明本次分离的12个毒株处于同一相对独立的分支,可能具有共同的来源,同时本次流行的毒株不是来源于本土毒株,而是来源于印度的毒株。本研究基于Hexon蛋白基因,设计引物,构建标准质粒,建立了RT-PCR的定量检测方法。在标准质粒拷贝数在10~2-10~9范围内,CT值与拷贝数具有良好的线性关系,特异性和重复性良好。同时选择HNZZ分离毒株通过肌肉注射人工感染21日龄SPF雏鸡,对照组注射等剂量的无菌生理盐水。逐日观察记录鸡的精神状态、发病情况、饮食饮水情况和存活时间,死亡后采集心脏、肝脏等器官,观察各器官病理组织学变化。结果显示,感染组鸡只出现精神沉郁、食欲不振、嗜睡等症状,并在2-3天内全部死亡,解剖发现典型的病理变化:淡黄色的心包积液和肝脏肿大;而对照组精神正常,饮水饮食正常,没有死亡,解剖也没有发现明显症状和病理损伤。结果表明,分离的病毒具有较强的致病性,与本次流行毒株临床症状一致。