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第一部分CEBPA突变在正常核型急性髓系白血病患者中的临床和预后研究目的：探索CEBPA基因突变在正常核型急性髓系白血病(CN-AML)患者中的临床和预后意义。方法：259例CN-AML患者标本,PCR扩增CEBPA基因编码区全长,用Sanger法测序进行突变检测。并对这些患者进行NPM1, FLT3, DNMT3A基因突变的筛查。分析CEBPA突变与临床和预后的关系。结果：在259例CN-AML患者中,共有79例(30.5%)患者发生CEBPA基因突变。43例(16.6%)为单突变,36例(13.9%)为双突变。CEBPA突变患者较野生型患者相比,多集中在FAB的M1,M2型(P=0.014)。双突变患者较单突变患者相比,血小板计数偏低(P=0.002),较少合并NPM1突变(P=0.003),并且双突变患者其他常见的分子学异常的合并率明显降低(P=0.001)。首次诱导完全缓解率在CEBPA双突变患者中为30/36例(83.3%),明显高于野生型患者95/180(52.8%)和单突变患者24/43(55.8%),P=0.003。CEBPA双突变患者其总生存期(OS)(3年OS：58.0±9.9%)较野生型患者(3年OS：35.5±4.2%)和单突变患者(3年OS：30.5±7.9%)明显延长,P=0.025。双突变患者尚可在无事件生存时间(EFS)上获益,3年EFS其在双突变,野生型和单突变患者中分别为(46.2±9.3%,25.8±3.5%和23.8±7.1%,P=0.026)。在多因素分析中,CEBPA双突变患者是OS的一个独立的好的预后因素(风险比=0.52,P=0.045),也是EFS的一个独立的好的预后因素(风险比=0.52,P=0.018)。结论：在CN-AML中,CEBPA基因单突变和双突变为两个独立的亚型,只有CEBPA双突变是预后良好的标志。第二部分探索CEBPA突变相关的重现性基因突变目的：探索CEBPA突变相关的重现性基因突变,分析突变蛋白功能,及其临床预后意义。方法：1.筛选候选基因：通过对一CEBPA突变的家族性急性髓系白血病(AML)的全基因组测序,生物信息学分析,筛选出CEBPA突变相关的重现性基因突变,并对候选基因进行常规Sanger法双向测序验证。2.候选基因大样本突变频率分析：收集100例AML患者标本(50例为CEBPA基因突变+50例CEBPA野生型),PCR扩增候选基因的突变区域及其他相对保守的扩展区域,用Sanger法测序进行突变检测。对已发现的重现性突变基因进一步扩大样本量筛查。3.突变蛋白功能分析：用PolyPhen-2软件对突变蛋白功能进行预测。构建带绿色荧光蛋白的突变蛋白表达质粒,转染于工具细胞,采用双荧光报告基因检测系统,对突变蛋白的转录活性进行分析。并用荧光显微镜观察突变蛋白的细胞内定位。4.突变基因临床及预后分析：收集86例CEBPA突变的AML患者临床,分子学和预后资料,分析重现性突变基因的临床特征,伴随分子学特点和对患者预后的影响。结果：1.我们发现4个可能的CEBPA突变相关的重现性突变基因,即CDC40, PRPS2, RAD21和GATA2.2.在50例CEBPA基因突变的AML患者中,有4例患者发生GATA2基因突变,没有发现CDC40, PRPS2和RAD21基因的突变。而在50例CEBPA野生型的AML患者中均没有发现上述4个基因的突变。进一步扩大样本量,我们发现一共有8/86(9.3%)CEBPA突变的AML患者存在GATA2基因突变。3. PolyPhen-2软件分发现所有检测到的GATA2突变类型均会影响蛋白功能。主要突变类型GATA2(p.A318V/c.953C>T)与野生型相比,转录激活作用减弱,但不影响蛋白的核内分布。4. GATA2突变和野生型患者在临床特征,分子学异常及完全缓解率上没有明显区别。但是GATA2mut/CEBPAdm患者其OS较GATA2mut/CEBPAsm, GATA2wt/CEBPAdm和GATA2wt/CEBPAsm患者有延长趋势(2年OS分别为100%,66.7±27.2%,73.1±8.8%和44.5±7.8%,P=0.151)。并且我们观察到GATA2mut/CEBPAdm患者其EFS较GATA2mut/CEBPAsm, GATA2wt/CEBPAdm和GATA2wt/CEBPAsm患者明显延长(2年EFS分别为：100%,66.7±27.2%,56.6±10.0%和27.0±±6.8%,P=0.015)。结论：GATA2突变在CEBPA基因突变的患者中具有较高的重现性,CEBPA双突变伴GATA2突变患者预后更好,但需要大样本的资料进一步验证。